Hoʻokaʻawale anei kahi centrifuge i ka dna mai nā protein?
Ke hoʻokaʻawale nei kahi Centrifuge i ka DNA mai nā protein?
Hoʻolauna
He ʻano hana koʻikoʻi ka centrifugation i hoʻohana nui ʻia i ka noiʻi ʻepekema a me nā keʻena hoʻokolohua lapaʻau no ka hoʻokaʻawale ʻana i nā ʻāpana like ʻole o kahi hāpana ma muli o ko lākou nui. ʻO kahi hoʻohana maʻamau o kēia ʻano hana e pili ana i ka hoʻokaʻawale ʻana i ka DNA a me nā protein mai kahi hāpana olaola i hāʻawi ʻia. Ma kēia ʻatikala, e ʻimi mākou inā hiki i kahi centrifuge ke hoʻokaʻawale pono i ka DNA mai nā protein a e ʻeli i loko o nā ʻano hana like ʻole i hoʻohana ʻia e hoʻokō i ka hoʻokaʻawale pono.
Ke Hoʻomaopopo ʻana i ka Centrifugation
Ma mua o ke komo ʻana i nā kikoʻī o ka hoʻokaʻawale ʻana i ka DNA mai nā protein me ka hoʻohana ʻana i kahi centrifuge, he mea nui e hoʻomaopopo i nā loina kumu o ka centrifugation. Hana ka centrifuge ma ke kumumanaʻo o ka sedimentation a hoʻohana i ka wili wikiwiki e hana i kahi ikaika centrifugal ikaika. Hoʻokaʻawale kēia ikaika i nā ʻāpana i loko o kahi hāpana ma muli o ko lākou nui, me nā ʻāpana paʻa e neʻe ana i lalo o ka ʻōmole hāpana. No laila, noho mau nā ʻāpana māmā ma luna.
Ka Paʻakikī o ka Hoʻokaʻawale ʻana i ka DNA a me nā Protein
I ka wā e pili ana i ka hoʻokaʻawale ʻana i ka DNA a me nā protein, he paʻakikī ia no ka mea he like nā kaumaha molekala o nā mole ʻelua. Me ka ʻole o kahi ʻano hoʻokaʻawale kūpono, he paʻakikī ke loaʻa ʻana o ka DNA maʻemaʻe a i ʻole nā laʻana protein. Eia nō naʻe, hiki i ka centrifugation ke kōkua i ke kaʻina hana hoʻokaʻawale, akā ʻaʻole paha e lawa ia ma kāna iho.
1. Centrifugation ʻokoʻa: Hoʻokaʻawale mua
2. Ultracentrifugation: Hoʻokaʻawale Hoʻonui ʻia
3. Density Gradient Centrifugation: Hoʻomaʻemaʻe i ke Kaʻina Hana
4. Ke Koʻikoʻi o ke Koho ʻana i ka Buffer
5. Centrifugation vs. Nā ʻenehana hoʻokaʻawale ʻē aʻe
ʻOkoʻa Centrifugation: Hoʻokaʻawale mua
ʻO ka centrifugation ʻokoʻa ka hana mua i ka hoʻokaʻawale ʻana i ka DNA mai nā protein. Hoʻohana kēia ʻano hana i nā wikiwiki centrifugation like ʻole e hoʻokō i kahi hoʻokaʻawale ākea o nā ʻāpana cellular. I loko o kēia kaʻina hana, ua hoʻokomo ʻia nā cell homogenized a i ʻole nā laʻana o nā ʻiʻo i ka centrifugation wikiwiki haʻahaʻa, ma kahi o 1000-5000 mau hoʻololi i kēlā me kēia minuke (rpm). ʻO kēia milo wikiwiki haʻahaʻa e hiki ai ke hoʻokaʻawale i nā nuclei a me nā cell i hoʻopaʻa ʻia, e alakaʻi ana i kahi fractionation crude. Eia naʻe, ʻaʻole ia e hāʻawi i kahi hoʻokaʻawale piha o ka DNA a me nā protein.
Ultracentrifugation: Hoʻokaʻawale Hoʻonui ʻia
No ka lanakila ʻana i nā palena o ka centrifugation ʻokoʻa, komo ka ultracentrifugation i ke kahua. ʻO nā Ultracentrifuges he mau centrifuges wikiwiki hiki ke hiki i ka wikiwiki a hiki i ka 100,000 rpm. Ma ke kau ʻana i ka hapa maka i loaʻa mai ka centrifugation haʻahaʻa mua i ka ultracentrifugation, hiki ke hoʻokō ʻia kahi pae kiʻekiʻe o ka hoʻokaʻawale ʻana ma waena o ka DNA a me nā protein. Hoʻomoe nā molekala DNA kaumaha i lalo o ka ʻōmole, e hana ana i kahi pellet i ʻike ʻia, ʻoiai e noho ana nā protein i loko o ka supernatant.
ʻO ka Density Gradient Centrifugation: Hoʻomaʻemaʻe i ke Kaʻina Hana
No ka hoʻomaʻemaʻe hou ʻana i ka hoʻokaʻawale ʻana o ka DNA a me nā protein, hoʻohana ʻia ka centrifugation density gradient. Ma kēia ʻano hana, ua hoʻomākaukau ʻia kahi medium density gradient, e like me ka sucrose a i ʻole cesium chloride. Aia kēia medium i kahi ʻano o nā densities, e hoʻonui ana mai luna a i lalo o ka paipu centrifuge. ʻO ka hapa maka i loaʻa mai ka hana ma mua ua kau pono ʻia ma luna o ka gradient density a ua hoʻokau hou ʻia i ka ultracentrifugation. Hoʻokaʻawale ka DNA a me nā protein ma muli o ko lākou densities a hana i nā hui like ʻole i loko o ka gradient. ʻO ka fractionation o ka gradient e ʻae i ka hoʻihoʻi ʻana o ka DNA maʻemaʻe a me nā laʻana protein.
Ke Koʻikoʻi o ke Koho ʻana i ka Buffer
ʻO ka buffer i hoʻohana ʻia i ka wā o ka centrifugation he kuleana koʻikoʻi ia i ka hoʻokō ʻana i ka hoʻokaʻawale pono. Hoʻopilikia ia i ke kūpaʻa a me ka pono o nā molekala e hoʻokaʻawale ʻia ana. No ka DNA, hoʻohana pinepine ʻia kahi buffer Tris-EDTA me ka pH o 8.0 ma muli o kona hiki ke mālama i ke kūpaʻa o ka DNA. Ma ka ʻaoʻao ʻē aʻe, pono nā protein i nā buffer me nā pae pH kikoʻī, ma kahi o 7.0, e pale aku i ka denaturation a mālama i ko lākou ʻano maoli. ʻO ke koho ʻana i ka buffer kūpono e hōʻoia i ka hoʻokaʻawale kūpono o ka DNA a me nā protein me ka ʻole o ka hoʻopilikia ʻana i ko lākou maikaʻi.
ʻO ke Centrifugation e kūʻē i nā ʻenehana hoʻokaʻawale ʻē aʻe
ʻOiai ʻo ka centrifugation kahi ʻenehana i hoʻohana nui ʻia i ka hoʻokaʻawale ʻana o ka DNA mai nā protein, he mea nui e ʻae ʻaʻole paha ʻo ia wale nō ke ʻano i hoʻohana ʻia. Hiki i nā ʻenehana ʻē aʻe, e like me ka chromatography, electrophoresis, a me ka precipitation, ke hoʻopiha i ka centrifugation e hoʻokō i kahi hoʻokaʻawale ʻoi aku ka maikaʻi. Loaʻa i kēlā me kēia ʻenehana kona mau pono a me nā palena ponoʻī, a hoʻohui pinepine nā mea noiʻi i nā ʻano hana he nui e loaʻa ai ka maʻemaʻe i makemake ʻia a me ka hoʻōla ʻana o ka DNA a me nā protein.
Hopena
I ka hopena, ʻoiai he mea pono ka centrifuge no ka hoʻokaʻawale ʻana i ka DNA mai nā protein, hana maikaʻi loa ia me nā ʻano hana ʻē aʻe. ʻO ka centrifugation ʻokoʻa, ultracentrifugation, a me ka density gradient centrifugation e hana i kahi moʻo o nā ʻanuʻu hoʻokaʻawale e kōkua ai i ka loaʻa ʻana o nā laʻana maʻemaʻe. Eia kekahi, ʻo ke koho ʻana i nā buffers kūpono a me ka noʻonoʻo ʻana i nā ʻano hana hoʻokaʻawale ʻē aʻe e hoʻonui hou i ka pono holoʻokoʻa o ka hoʻokaʻawale ʻana o ka DNA-protein.
.