a bheil centrifuge a’ sgaradh DNA bho phròtainean

A bheil Centrifuge a’ sgaradh DNA bho phròtainean?

Ro-ràdh

Tha centrifuge na dhòigh-obrach riatanach a thathas a’ cleachdadh gu farsaing ann an rannsachadh saidheansail agus deuchainn-lannan clionaigeach airson diofar phàirtean de shampall a sgaradh a rèir an dùmhlachd. Is e aon chleachdadh cumanta den dòigh-obrach seo DNA agus pròtainean a sgaradh bho shampall bith-eòlasach sònraichte. San artaigil seo, rannsaichidh sinn a bheil centrifuge comasach air DNA a sgaradh gu h-èifeachdach bho phròtainean agus nì sinn sgrùdadh air na diofar dhòighean-obrach a thathas a’ cleachdadh gus dealachadh èifeachdach a choileanadh.

A’ Tuigsinn Meadhanachadh

Mus tèid sinn nas doimhne a-steach do na mion-fhiosrachadh mu bhith a’ sgaradh DNA bho phròtainean le bhith a’ cleachdadh inneal-snìomhaidh, tha e cudromach tuigse fhaighinn air prionnsapalan bunaiteach an t-snìomhaidh. Bidh inneal-snìomhaidh ag obair air prionnsapal an t-sìolaidh agus a’ cleachdadh snìomh aig astar luath gus feachd làidir an t-snìomhaidh a chruthachadh. Bidh an fheachd seo ag adhbhrachadh gum bi mìrean ann an sampall a’ sgaradh a rèir an dùmhlachd, le mìrean nas dùmhaile a’ gluasad a dh’ionnsaigh bonn an tiùba sampall. Mar thoradh air an sin, bidh mìrean nas aotroime buailteach fuireach aig a’ mhullach.

An Dùbhlan a thaobh DNA agus Pròtainean a sgaradh

Nuair a thig e gu bhith a’ sgaradh DNA agus pròtainean, tha e na dhùbhlan leis gu bheil cuideaman moileciuil coltach ri chèile aig an dà mholaciul. Às aonais dòigh-obrach sgaradh èifeachdach, tha e duilich sampallan DNA no pròtain fìor-ghlan fhaighinn. Ach, faodaidh centrifugation cuideachadh leis a’ phròiseas sgaradh, ach is dòcha nach bi e gu leòr leis fhèin.

1. Ceudachadh Eadar-dhealaichte: Dealachadh Tùsail

2. Ultracentrifugation: Dealachadh Leasaichte

3. Ceum-sgèileadh Dlùthsachd: A’ mìneachadh a’ phròiseis

4. Cudromachd Taghadh Bufair

5. Ceudachadh an aghaidh dhòighean dealachaidh eile

Ceudachadh Eadar-dhealaichte: Dealachadh Tùsail

’S e ceud-shuidheachadh eadar-dhealaichte a’ chiad cheum ann a bhith a’ sgaradh DNA bho phròtainean. Bidh an dòigh seo a’ cleachdadh diofar astaran ceud-shuidheachaidh gus dealachadh farsaing de phàirtean ceallach a choileanadh. Rè a’ mhodh-obrachaidh seo, bidh ceallan no sampallan clò homogenichte air an cur fo cheud-shuidheachadh aig astar ìosal, mar as trice timcheall air 1000-5000 cuairt-chuairt gach mionaid (rpm). Leigidh an snìomh ìosal seo le dealachadh niuclasan agus ceallan slàn, a’ leantainn gu roinneadh amh. Ach, chan eil e a’ toirt seachad dealachadh iomlan de DNA agus phròtainean.

Ultracentrifugation: Dealachadh Leasaichte

Gus faighinn thairis air crìochan an t-sincrifugachaidh eadar-dhealaichte, thig ultra-sincrifugation a-steach don t-sealladh. Is e centrifuges àrd-astar a th’ ann an ultra-sincrifuges as urrainn astaran suas ri 100,000 rpm a ruighinn. Le bhith a’ cur an co-mheas amh a gheibhear bhon t-sincrifugation tùsail aig astar ìosal fo ultra-sincrifugation, faodar ìre nas àirde de sgaradh eadar DNA agus pròtainean a choileanadh. Bidh na moileciuilean DNA troma a’ tuiteam sìos gu bonn an tiùba, a’ cruthachadh peileat faicsinneach, agus bidh pròtainean a’ fuireach anns an t-supernatant.

Ceum-sgrìobadh Dlùthsachd: A’ mìneachadh a’ phròiseis

Gus dealachadh DNA agus phròtainean a ghrinneachadh tuilleadh, thathar a’ cleachdadh ceudrifugachadh dùmhlachd-crioptachaidh. Anns an dòigh seo, thathar ag ullachadh meadhan dùmhlachd-crioptachaidh, leithid siùcros no clòraid cesium. Tha am meadhan seo a’ toirt a-steach raon de dhùmhlachdan, ag àrdachadh bho mhullach gu bonn tiùb an centrifuge. Tha an co-mheas amh a gheibhear bhon cheum roimhe air a chur gu faiceallach air mullach a’ chlaonaidh dùmhlachd agus air a chur fo ultra-chrioptachadh a-rithist. Bidh an DNA agus na pròtainean a’ sgaradh a rèir an dùmhlachdan agus a’ cruthachadh còmhlain fa leth taobh a-staigh a’ chlaonaidh. Leigidh sgoltadh a’ chlaonaidh le bhith a’ faighinn air ais sampallan DNA agus pròtain fìor-ghlan.

Cudromachd Taghadh Bufair

Tha pàirt chudromach aig a’ bhufair a thathar a’ cleachdadh rè centrifugation ann a bhith a’ coileanadh dealachadh èifeachdach. Bidh e a’ toirt buaidh air seasmhachd agus ionracas nam moileciuilean a thathar a’ sgaradh. Airson DNA, thathas a’ cleachdadh bufair Tris-EDTA le pH de 8.0 gu cumanta air sgàth a chomas seasmhachd DNA a chumail suas. Air an làimh eile, feumaidh pròtainean bufairean le ìrean pH sònraichte, mar as trice timcheall air 7.0, gus casg a chuir air dì-nàdarrachadh agus an structar dùthchasach aca a chumail suas. Le bhith a’ taghadh a’ bhufair iomchaidh, bidh sin a’ dèanamh cinnteach à dealachadh ceart DNA agus pròtainean gun a bhith a’ dèanamh cron air an càileachd.

Centrifugation an aghaidh dhòighean dealachaidh eile

Ged a tha centrifugation na dhòigh-obrach a thathas a’ cleachdadh gu farsaing ann an sgaradh DNA bho phròtainean, tha e cudromach aideachadh nach e seo an aon dhòigh a thathas a’ cleachdadh. Faodaidh dòighean eile, leithid cromatagrafaidheachd, electrophoresis, agus sileadh, cur ri centrifugation gus dealachadh nas grinne fhaighinn. Tha na buannachdan agus na crìochan aige fhèin aig gach dòigh-obrach, agus bidh luchd-rannsachaidh gu tric a’ cothlamadh iomadh dòigh gus an ìre de ghlanachd agus ath-bheothachadh a tha a dhìth fhaighinn bho DNA agus phròtainean.

Co-dhùnadh

Mar cho-dhùnadh, ged a tha centrifuge feumail airson DNA a sgaradh bho phròtainean, bidh e ag obair as fheàrr còmhla ri dòighean eile. Tha centrifuge eadar-dhealaichte, ultracentrifuge, agus centrifuge dùmhlachd-gradient a’ cruthachadh sreath de cheumannan dealachaidh a chuidicheas le bhith a’ faighinn sampallan nas glaine. A bharrachd air an sin, bidh taghadh bufairean iomchaidh agus beachdachadh air dòighean dealachaidh eile a’ neartachadh èifeachdas iomlan dealachaidh DNA-pròtain.