சென்ட்ரிஃபியூஜ் செப்பரேட்டர் மற்றும் மருந்து இயந்திரங்களின் தொழில்முறை உற்பத்தி நிறுவனம் - ஸோன்லிங்க்
மையவிலக்கு இயந்திரம் டிஎன்ஏ-வை புரதங்களிலிருந்து பிரிக்கிறதா?
மையவிலக்கு இயந்திரம் டிஎன்ஏ-வை புரதங்களிலிருந்து பிரிக்குமா?
அறிமுகம்
மையவிலக்கு முறை என்பது, ஒரு மாதிரியின் பல்வேறு கூறுகளை அவற்றின் அடர்த்தியின் அடிப்படையில் பிரிப்பதற்காக, அறிவியல் ஆராய்ச்சி மற்றும் மருத்துவ ஆய்வகங்களில் பரவலாகப் பயன்படுத்தப்படும் ஒரு முக்கிய நுட்பமாகும். இந்த நுட்பத்தின் ஒரு பொதுவான பயன்பாடு, கொடுக்கப்பட்ட ஒரு உயிரியல் மாதிரியிலிருந்து டி.என்.ஏ மற்றும் புரதங்களைப் பிரித்தெடுப்பதாகும். இந்தக் கட்டுரையில், ஒரு மையவிலக்கு இயந்திரத்தால் புரதங்களிலிருந்து டி.என்.ஏ-வை திறம்படப் பிரிக்க முடியுமா என்பதை ஆராய்வதோடு, திறமையான பிரித்தலை அடைவதற்காகப் பயன்படுத்தப்படும் பல்வேறு வழிமுறைகளையும் ஆழமாகப் பார்ப்போம்.
மையவிலக்கு விசையைப் புரிந்துகொள்ளுதல்
மையவிலக்கு இயந்திரத்தைப் பயன்படுத்தி புரதங்களிலிருந்து டி.என்.ஏ-வைப் பிரிப்பதன் நுணுக்கங்களுக்குள் செல்வதற்கு முன், மையவிலக்கு முறையின் அடிப்படைக் கொள்கைகளைப் புரிந்துகொள்வது அவசியம். ஒரு மையவிலக்கு இயந்திரம், படிதல் கொள்கையின் அடிப்படையில் செயல்படுகிறது மற்றும் ஒரு வலுவான மையவிலக்கு விசையை உருவாக்க அதிவேகச் சுழற்சியைப் பயன்படுத்துகிறது. இந்த விசையானது, ஒரு மாதிரியில் உள்ள துகள்களை அவற்றின் அடர்த்தியின் அடிப்படையில் பிரிக்கிறது; அடர்த்தியான துகள்கள் மாதிரிக் குழாயின் அடிப்பகுதியை நோக்கி நகர்கின்றன. இதன் விளைவாக, இலேசான துகள்கள் மேற்பகுதியில் தங்கிவிட முனைகின்றன.
டிஎன்ஏ மற்றும் புரதங்களைப் பிரிப்பதில் உள்ள சவால்
டிஎன்ஏ மற்றும் புரதங்களைப் பிரிக்கும்போது, இரண்டு மூலக்கூறுகளும் ஏறக்குறைய ஒரே மூலக்கூறு எடையைக் கொண்டிருப்பதால், அது ஒரு சவாலாக அமைகிறது. ஒரு திறமையான பிரித்தல் நுட்பம் இல்லாமல், தூய டிஎன்ஏ அல்லது புரத மாதிரிகளைப் பெறுவது கடினம். இருப்பினும், மையவிலக்கு முறை (centrifugation) பிரித்தல் செயல்முறைக்கு உதவக்கூடும், ஆனால் அது மட்டுமே போதுமானதாக இருக்காது.
1. வேறுபாட்டு மையவிலக்கம்: ஆரம்பப் பிரிப்பு
2. அதிவேக மையவிலக்கம்: மேம்படுத்தப்பட்ட பிரிப்பு
3. அடர்த்தி சரிவு மையவிலக்கம்: செயல்முறையைச் செம்மைப்படுத்துதல்
4. இடையகத் தேர்வின் முக்கியத்துவம்
5. மையவிலக்கு முறை மற்றும் பிற பிரித்தல் நுட்பங்கள்
வேறுபட்ட மையவிலக்கம்: ஆரம்பப் பிரிப்பு
டிஃபரென்ஷியல் சென்ட்ரிஃபியூகேஷன் என்பது டிஎன்ஏ-வை புரதங்களிலிருந்து பிரிப்பதற்கான முதல் படியாகும். இந்த முறை, செல்லுலார் கூறுகளின் பரந்த பிரித்தலை அடைவதற்காக வெவ்வேறு சென்ட்ரிஃபியூகேஷன் வேகங்களைப் பயன்படுத்துகிறது. இந்த செயல்முறையின் போது, ஒருபடித்தாக்கப்பட்ட செல்கள் அல்லது திசு மாதிரிகள் குறைந்த வேக சென்ட்ரிஃபியூகேஷனுக்கு உட்படுத்தப்படுகின்றன, பொதுவாக நிமிடத்திற்கு சுமார் 1000-5000 சுழற்சிகள் (rpm). இந்த குறைந்த வேக சுழற்சியானது உட்கருக்களையும் முழுமையான செல்களையும் பிரிக்க உதவுகிறது, இது ஒரு தோராயமான பின்னப் பிரிப்புக்கு வழிவகுக்கிறது. இருப்பினும், இது டிஎன்ஏ மற்றும் புரதங்களின் முழுமையான பிரித்தலை வழங்குவதில்லை.
அதிவேக மையவிலக்கம்: மேம்படுத்தப்பட்ட பிரிப்பு
வேறுபாட்டு மையவிலக்கத்தின் வரம்புகளைக் கடக்க, அதிவேக மையவிலக்கம் பயன்பாட்டிற்கு வருகிறது. அதிவேக மையவிலக்கிகள் என்பவை நிமிடத்திற்கு 100,000 சுழற்சிகள் வரை வேகத்தை எட்டக்கூடிய அதிவேக மையவிலக்கிகள் ஆகும். ஆரம்பக்கட்ட குறைந்த வேக மையவிலக்கத்திலிருந்து பெறப்பட்ட தூய்மையற்ற பகுதியை அதிவேக மையவிலக்கத்திற்கு உட்படுத்துவதன் மூலம், டி.என்.ஏ மற்றும் புரதங்களுக்கு இடையே ஒரு உயர் மட்டப் பிரித்தலை அடைய முடியும். கனமான டி.என்.ஏ மூலக்கூறுகள் குழாயின் அடிப்பகுதியில் படிந்து, கண்ணுக்குத் தெரியும் ஒரு உருண்டையை உருவாக்குகின்றன, அதே சமயம் புரதங்கள் மேல்தேங்கிய திரவத்தில் தங்கிவிடுகின்றன.
அடர்த்தி சாய்வு மையவிலக்கம்: செயல்முறையைச் செம்மைப்படுத்துதல்
டிஎன்ஏ மற்றும் புரதங்களின் பிரித்தலை மேலும் செம்மைப்படுத்த, அடர்த்தி சாய்வு மையவிலக்கம் பயன்படுத்தப்படுகிறது. இந்த நுட்பத்தில், சுக்ரோஸ் அல்லது சீசியம் குளோரைடு போன்ற ஒரு அடர்த்தி சாய்வு ஊடகம் தயாரிக்கப்படுகிறது. இந்த ஊடகம், மையவிலக்கக் குழாயின் மேலிருந்து கீழ் வரை அதிகரிக்கும் பல்வேறு அடர்த்திகளைக் கொண்டுள்ளது. முந்தைய படியிலிருந்து பெறப்பட்ட தூய்மையற்ற பகுதி, அடர்த்தி சாய்வின் மீது கவனமாக அடுக்கப்பட்டு, மீண்டும் ஒருமுறை அதிவேக மையவிலக்கத்திற்கு உட்படுத்தப்படுகிறது. டிஎன்ஏ மற்றும் புரதங்கள் அவற்றின் அடர்த்திகளின் அடிப்படையில் பிரிந்து, சாய்வுக்குள் தனித்தனி பட்டைகளை உருவாக்குகின்றன. சாய்வைப் பகுத்தல், தூய டிஎன்ஏ மற்றும் புரத மாதிரிகளை மீட்டெடுக்க அனுமதிக்கிறது.
இடையகத் தேர்வின் முக்கியத்துவம்
திறமையான பிரித்தலை அடைவதில், மையவிலக்குச் சுழற்சியின் போது பயன்படுத்தப்படும் தாங்கல் கரைசல் ஒரு முக்கியப் பங்கு வகிக்கிறது. இது பிரிக்கப்படும் மூலக்கூறுகளின் நிலைத்தன்மை மற்றும் முழுமைத்தன்மையைப் பாதிக்கிறது. டி.என்.ஏ-விற்கு, அதன் நிலைத்தன்மையைப் பராமரிக்கும் திறனின் காரணமாக, 8.0 pH மதிப்பு கொண்ட டிரிஸ்-ஈ.டி.டி.ஏ தாங்கல் கரைசல் பொதுவாகப் பயன்படுத்தப்படுகிறது. மறுபுறம், புரதங்கள் அவற்றின் இயல்பு மாற்றத்தைத் தடுக்கவும், அவற்றின் இயல்பு அமைப்பைப் பராமரிக்கவும், பொதுவாக 7.0-ஐச் சுற்றியுள்ள குறிப்பிட்ட pH அளவுகள் கொண்ட தாங்கல் கரைசல்களைக் கோருகின்றன. பொருத்தமான தாங்கல் கரைசலைத் தேர்ந்தெடுப்பது, டி.என்.ஏ மற்றும் புரதங்களின் தரத்தில் சமரசம் செய்யாமல், அவற்றின் சரியான பிரித்தலை உறுதி செய்கிறது.
மையவிலக்கு முறை மற்றும் பிற பிரித்தல் நுட்பங்கள்
புரதங்களிலிருந்து டி.என்.ஏ-வைப் பிரித்தெடுப்பதில் மையவிலக்கு முறை பரவலாகப் பயன்படுத்தப்படும் ஒரு நுட்பமாக இருந்தாலும், அது மட்டுமே பயன்படுத்தப்படும் ஒரே முறையாக இருக்காது என்பதை ஒப்புக்கொள்வது அவசியம். நிறப்பிரிகை, மின்புலப் பிரிப்பு மற்றும் வீழ்படிவாக்கம் போன்ற பிற நுட்பங்கள், மேலும் செம்மையான பிரித்தெடுப்பை அடைவதற்காக மையவிலக்கு முறைக்குத் துணையாக அமையலாம். ஒவ்வொரு நுட்பத்திற்கும் அதற்கே உரிய நன்மைகளும் வரம்புகளும் உள்ளன, மேலும் ஆராய்ச்சியாளர்கள் டி.என்.ஏ மற்றும் புரதங்களின் விரும்பிய தூய்மையையும் மீட்டெடுப்பையும் பெறுவதற்காகப் பல முறைகளை அடிக்கடி ஒன்றிணைக்கின்றனர்.
முடிவு
முடிவாக, புரதங்களிலிருந்து டி.என்.ஏ-வைப் பிரிப்பதற்கு மையவிலக்கி பயனுள்ளதாக இருந்தாலும், அது மற்ற நுட்பங்களுடன் இணைந்து செயல்படும்போது மிகச் சிறப்பாக இயங்குகிறது. வேறுபாட்டு மையவிலக்கி, மீமையவிலக்கி, மற்றும் அடர்த்திச் சரிவு மையவிலக்கி ஆகியவை தூய்மையான மாதிரிகளைப் பெற உதவும் தொடர்ச்சியான பிரித்தல் படிநிலைகளை உருவாக்குகின்றன. மேலும், பொருத்தமான இடையகங்களைத் தேர்ந்தெடுப்பதும், பிற பிரித்தல் நுட்பங்களைக் கருத்தில் கொள்வதும் டி.என்.ஏ-புரதப் பிரித்தலின் ஒட்டுமொத்த செயல்திறனை மேலும் மேம்படுத்துகின்றன.
.