Manasaraka ny ADN amin'ny proteinina ve ny centrifuge?

Manasaraka ny ADN amin'ny Prôteina ve ny Centrifuge?

Sava lalana

Teknika tena ilaina ampiasaina betsaka amin'ny fikarohana siantifika sy laboratoara klinika ny "centrifugation" mba hanasarahana ireo singa samihafa ao anaty santionany mifototra amin'ny hakitroky ny singa tsirairay. Ny fampiharana mahazatra an'io teknika io dia ny fanasarahana ny ADN sy ny proteinina avy amin'ny santionany biolojika iray. Ato amin'ity lahatsoratra ity, dia hojerentsika raha afaka manasaraka tsara ny ADN amin'ny proteinina ny "centrifuge" ary handinika ireo fomba fiasa samihafa ampiasaina mba hahazoana fisarahana mahomby.

Fahatakarana ny Centrifugation

Alohan'ny hidirana amin'ny antsipiriany momba ny fanasarahana ny ADN amin'ny proteinina amin'ny fampiasana "centrifuge", dia zava-dehibe ny mahatakatra ny foto-kevitra fototra amin'ny "centrifugation". Miasa amin'ny foto-kevitry ny "sedimentation" ny "centrifuge" ary mampiasa fihodinana haingam-pandeha mba hamoronana hery "centrifuge" matanjaka. Io hery io dia mahatonga ny poti-javatra ao anaty santionany hisaraka arakaraka ny hakitroky ny poti-javatra, miaraka amin'ireo poti-javatra matevina kokoa mifindra monina mankany amin'ny faran'ny fantsona santionany. Vokatr'izany, ireo poti-javatra maivana kokoa dia mirona hijanona eo an-tampony.

Ny fanamby amin'ny fanasarahana ny ADN sy ny proteinina

Raha ny amin'ny fanasarahana ny ADN sy ny proteinina, dia miteraka olana izany satria mitovy ny lanjan'ny molekiola roa. Raha tsy misy teknika fanasarahana mahomby, dia sarotra ny mahazo santionan'ny ADN na proteinina madio. Na izany aza, ny centrifugation dia afaka manampy amin'ny dingana fanasarahana, saingy mety tsy ho ampy izany raha irery.

1. Fampidirana amin'ny alalan'ny "Cenrifugation" samihafa: Fisarahana voalohany

2. Ultracentrifugation: Fisarahana Nohatsaraina

3. Fanesorana ny fiovaovan'ny hakitroky amin'ny alalan'ny "density gradient centrifugation": Fanatsarana ny fomba fiasa

4. Ny maha-zava-dehibe ny fisafidianana buffer

5. Fanesorana amin'ny alalan'ny "Cenrifugation" raha oharina amin'ny teknika fanasarahana hafa

Fampidirana amin'ny alalan'ny centrifugation samihafa: Fisarahana voalohany

Ny "centrifugation" samihafa no dingana voalohany amin'ny fanasarahana ny ADN amin'ny proteinina. Mampiasa hafainganam-pandeha samihafa ity fomba ity mba hahazoana fisarahana midadasika amin'ny singa sela. Mandritra ity fomba fiasa ity, ny sela na santionan'ny sela efa voahodina dia iharan'ny "centrifugation" miadana, matetika eo amin'ny 1000-5000 fihodinana isan-minitra (rpm). Io fihodinana miadana io dia ahafahana manasaraka ny nokleary sy ny sela tsy simba, ka miteraka fizarazarana manta. Na izany aza, tsy manome fisarahana tanteraka ny ADN sy ny proteinina izany.

Ultracentrifugation: Fisarahana Nohamafisina

Mba handresena ireo fetran'ny centrifugation differential, dia miditra an-tsehatra ny ultracentrifugation. Ny ultracentrifuges dia centrifuges haingam-pandeha afaka mahatratra hafainganam-pandeha hatramin'ny 100,000 rpm. Amin'ny alàlan'ny fampidirana ny ampahany manta azo avy amin'ny centrifugation miadana voalohany amin'ny ultracentrifugation, dia azo tratrarina ny ambaratonga ambony kokoa amin'ny fisarahana eo amin'ny ADN sy ny proteinina. Milentika any amin'ny faran'ny fantsona ireo molekiola ADN mavesatra, ka mamorona pellet hita maso, raha mijanona ao anaty supernatant kosa ny proteinina.

Fanesorana ny Density Gradient: Fanatsarana ny Dingana

Mba hanatsarana bebe kokoa ny fisarahana ny ADN sy ny proteinina, dia ampiasaina ny "density gradient centrifugation". Amin'ity teknika ity, dia misy "density gradient medium" toy ny sucrose na cesium chloride" omanina. Ity "density medium" ity dia misy karazana "density" isan-karazany, izay mitombo hatrany ambony ka hatrany ambany amin'ny fantsona "centrifuge". Ny ampahany manta azo avy amin'ny dingana teo aloha dia apetraka tsara eo ambonin'ny "density gradient" ary iharan'ny "ultracentrifugation" indray. Misaraka araka ny hakitroky ny ADN sy ny proteinina ary mamorona tarika miavaka ao anatin'ny "gradient". Ny "fragmentation" an'ny gradient dia ahafahana mamerina ny santionan'ny ADN sy proteinina madio.

Ny maha-zava-dehibe ny fisafidianana buffer

Ny buffer ampiasaina mandritra ny centrifugation dia mitana anjara toerana lehibe amin'ny fanasarahana mahomby. Misy fiantraikany amin'ny fahamarinan-toerana sy ny tsy fivadihan'ny molekiola sarahina izany. Ho an'ny ADN, ny buffer Tris-EDTA misy pH 8.0 dia matetika ampiasaina noho ny fahafahany mitazona ny fahamarinan'ny ADN. Etsy ankilany, ny proteinina dia mila buffer manana pH manokana, matetika manodidina ny 7.0, mba hisorohana ny denaturation sy hitazonana ny rafitra niaviany. Ny fisafidianana ny buffer mety dia miantoka ny fanasarahana araka ny tokony ho izy ny ADN sy ny proteinina nefa tsy manimba ny kalitaony.

Fanenjanana raha oharina amin'ny teknika fanasarahana hafa

Na dia teknika ampiasaina betsaka amin'ny fanasarahana ny ADN amin'ny proteinina aza ny centrifugation, dia zava-dehibe ny manaiky fa mety tsy io irery no fomba ampiasaina. Ny teknika hafa, toy ny chromatography, electrophoresis, ary precipitation, dia afaka manampy ny centrifugation mba hahazoana fisarahana voadio kokoa. Ny teknika tsirairay dia manana ny tombony sy ny fetrany manokana, ary matetika ny mpikaroka dia mampifangaro fomba maro mba hahazoana ny fahadiovana sy ny famerenana amin'ny laoniny ny ADN sy ny proteinina.

Famaranana

Ho fehiny, na dia tena ilaina amin'ny fanasarahana ny ADN amin'ny proteinina aza ny "centrifuge", dia miasa tsara indrindra izy io miaraka amin'ny teknika hafa. Ny "differential centrifugation", ny "ultracentrifugation", ary ny "density gradient centrifugation" dia mamorona andiana dingana fanasarahana izay manampy amin'ny fahazoana santionany madio kokoa. Fanampin'izany, ny fisafidianana "buffers" mety sy ny fandinihana ireo teknika fanasarahana hafa dia mampitombo bebe kokoa ny fahombiazan'ny fanasarahana ny ADN-proteinina amin'ny ankapobeny.