Gelo santrifûj DNAyê ji proteînan vediqetîne

Gelo Santrifûj DNAyê ji Proteînan Veqetîne?

Pêşkêş

Santrifûjkirin teknîkek girîng e ku bi berfirehî di lêkolînên zanistî û laboratuarên klînîkî de tê bikar anîn da ku pêkhateyên cûda yên nimûneyekê li gorî dendika wan ji hev veqetîne. Yek ji sepandinên hevpar ên vê teknîkê veqetandina DNA û proteînan ji nimûneyek biyolojîkî ya diyarkirî ye. Di vê gotarê de, em ê lêkolîn bikin ka santrifûjek dikare bi bandor DNA ji proteînan veqetîne û li rêbazên cûda yên ku ji bo bidestxistina veqetandina bi bandor têne bikar anîn bigerin.

Têgihîştina Santrifûjkirinê

Berî ku em bikevin nav taybetmendiyên veqetandina DNAyê ji proteînan bi karanîna santrifûjekê, girîng e ku meriv prensîbên bingehîn ên santrifûjkirinê fêm bike. Santrifûj li ser prensîba rûniştinê dixebite û ji bo afirandina hêzek santrifûj a bihêz, zivirîna bi leza bilind bikar tîne. Ev hêz dibe sedema ku perçeyên di nimûneyê de li gorî dendika wan ji hev veqetin, û perçeyên ziravtir ber bi binê lûleya nimûneyê ve diçin. Di encamê de, perçeyên siviktir meyla wan heye ku li jor bimînin.

Zehmetiya Veqetandina DNA û Proteînan

Dema ku dor tê ser veqetandina DNA û proteînan, ew dibe sedema dijwarîyan ji ber ku her du molekul jî xwedî giraniya molekulî ya wekhev in. Bêyî teknîkek veqetandinê ya bi bandor, zehmet e ku meriv nimûneyên DNA an proteîna saf bi dest bixe. Lêbelê, santrifujkirin dikare di pêvajoya veqetandinê de bibe alîkar, lê dibe ku bi tena serê xwe ne bes be.

1. Santrifujkirina Cûda: Veqetandina Destpêkê

2. Ultrasantrifûjkirin: Veqetandina Pêşkeftî

3. Santrifûjkirina Gradienta Densiyê: Paqijkirina Pêvajoyê

4. Girîngiya Hilbijartina Tamponê

5. Santrifûjkirin li hember Teknîkên Din ên Veqetandinê

Santrifujkirina Cûda: Veqetandina Destpêkê

Santrifujkirina cuda gava yekem e di veqetandina DNAyê ji proteînan de. Ev rêbaz leza santrifujkirina cuda bikar tîne da ku veqetandinek berfireh a pêkhateyên şaneyê pêk bîne. Di vê prosedurê de, şaneyên homojenkirî an nimûneyên tevnan rastî santrifujkirina bi leza nizm tên, bi gelemperî dora 1000-5000 zivirandin di hûrdemê de (rpm). Ev zivirîna bi leza nizm veqetandina navik û şaneyên saxlem gengaz dike, ku dibe sedema parçekirinek xav. Lêbelê, ew veqetandinek tevahî ya DNA û proteînan peyda nake.

Ultrasantrifûjkirin: Veqetandina Pêşkeftî

Ji bo derbaskirina sînordariyên santrifujkirina cuda, ultrasantrifujkirin dikeve dewrê. Ultrasantrifuj santrifujên bilez in ku dikarin bigihîjin leza heta 100,000 rpm. Bi xistina fraksiyona xav a ku ji santrifujkirina destpêkê ya bi leza nizm hatî bidestxistin ultrasantrifujkirinê, astek bilindtir a veqetandinê di navbera DNA û proteînan de dikare were bidestxistin. Molekulên giran ên DNA li binê lûleyê rûdinin, peletek xuya çêdikin, di heman demê de proteîn di supernatantê de dimînin.

Santrifûjkirina Gradienta Densiyê: Paqijkirina Pêvajoyê

Ji bo bêtir zelalkirina veqetandina DNA û proteînan, santrifujkirina gradyana densitiyê tê bikar anîn. Di vê teknîkê de, navgînek gradyana densitiyê, wekî sukroz an sezyûm klorîd, tê amadekirin. Ev navgîn ji rêzek densitiyan pêk tê, ku ji jor ber bi jêrê lûleya santrifujê ve zêde dibin. Fraksiyona xav a ku ji gava berê hatî bidestxistin bi baldarî li ser gradyana densitiyê tê danîn û careke din rastî ultrasantrifujkirinê tê. DNA û proteîn li gorî densitiyên xwe ji hev vediqetin û di nav gradyanê de bendeyên cuda çêdikin. Parçekirina gradyanê dihêle ku nimûneyên DNA û proteîna paqij werin bidestxistin.

Girîngiya Hilbijartina Tamponê

Tampona ku di dema santrifujkirinê de tê bikar anîn roleke girîng di bidestxistina veqetandina bi bandor de dilîze. Ew bandorê li ser aramiya û yekparçeyiya molekulên ku têne veqetandin dike. Ji bo DNAyê, tamponek Tris-EDTA bi pH-a 8.0 bi gelemperî tê bikar anîn ji ber ku ew dikare aramiya DNAyê biparêze. Ji hêla din ve, proteîn ji bo pêşîgirtina li denaturasyonê û parastina avahiya xweya xwemalî hewceyê tamponên bi astên pH-ê yên taybetî ne, bi gelemperî li dora 7.0. Hilbijartina tampona guncaw veqetandina rast a DNA û proteînan bêyî ku kalîteya wan xirab bibe misoger dike.

Santrifûjkirin li hember Teknîkên Din ên Veqetandinê

Her çend santrifujkirin teknîkek berbelav e di veqetandina DNAyê ji proteînan de, girîng e ku were zanîn ku dibe ku ew ne tenê rêbaza ku tê bikar anîn be. Teknîkên din, wekî kromatografi, elektroforez û barîn, dikarin santrifujkirinê temam bikin da ku veqetandinek safîtir bi dest bixin. Her teknîkek xwedî avantaj û sînorkirinên xwe ye, û lêkolîner pir caran gelek rêbazan li hev dicivînin da ku paqijiya xwestî û vegerandina DNA û proteînan bi dest bixin.

Xelasî

Di encamê de, her çend santrifûj bi rastî ji bo veqetandina DNA ji proteînan bikêr be jî, ew bi teknîkên din re çêtirîn dixebite. Santrifûjkirina cûda, ultrasantrifûjkirin, û santrifûjkirina gradyana densiteyê rêze gavên veqetandinê pêk tînin ku di bidestxistina nimûneyên paqijtir de dibin alîkar. Wekî din, hilbijartina tamponên guncaw û berçavgirtina teknîkên veqetandinê yên din karîgeriya giştî ya veqetandina DNA-proteînê bêtir zêde dike.