centrifuge က DNA ကို ပရိုတင်းတွေကနေ ခွဲထုတ်သလား

ဗဟိုခွာစက်က DNA ကို ပရိုတင်းနဲ့ ခွဲထုတ်နိုင်ပါသလား။

မိတ်ဆက်

ဗဟိုခွာခြင်းဆိုသည်မှာ သိပ္ပံနည်းကျသုတေသနနှင့် ဆေးခန်းဓာတ်ခွဲခန်းများတွင် နမူနာ၏ အစိတ်အပိုင်းအမျိုးမျိုးကို ၎င်းတို့၏သိပ်သည်းဆအပေါ်အခြေခံ၍ ခွဲထုတ်ရန်အတွက် ကျယ်ကျယ်ပြန့်ပြန့်အသုံးပြုသည့် အရေးကြီးသောနည်းပညာတစ်ခုဖြစ်သည်။ ဤနည်းပညာကို အသုံးများသောအသုံးချမှုတစ်ခုမှာ ပေးထားသောဇီဝဗေဒဆိုင်ရာနမူနာမှ DNA နှင့် ပရိုတင်းများကို ခွဲထုတ်ခြင်းဖြစ်သည်။ ဤဆောင်းပါးတွင်၊ ဗဟိုခွာခြင်းသည် ပရိုတင်းများမှ DNA ကို ထိရောက်စွာခွဲထုတ်နိုင်ခြင်းရှိမရှိနှင့် ထိရောက်သောခွဲထုတ်မှုရရှိရန်အသုံးပြုသည့် နည်းလမ်းအမျိုးမျိုးကို လေ့လာပါမည်။

ဗဟိုခွာခြင်းကို နားလည်ခြင်း

ဗဟိုခွာစက်ကို အသုံးပြု၍ DNA မှ ပရိုတင်းများကို ခွဲထုတ်ခြင်း၏ အသေးစိတ်အချက်အလက်များကို မလေ့လာမီ၊ ဗဟိုခွာစက်၏ အခြေခံမူများကို နားလည်ရန် အရေးကြီးပါသည်။ ဗဟိုခွာစက်သည် အနည်ထိုင်ခြင်း၏ အခြေခံမူပေါ်တွင် လုပ်ဆောင်ပြီး မြန်နှုန်းမြင့် လည်ပတ်မှုကို အသုံးပြု၍ အားကောင်းသော ဗဟိုခွာအားကို ဖန်တီးပေးသည်။ ဤအားသည် နမူနာရှိ အမှုန်များကို ၎င်းတို့၏ သိပ်သည်းဆအပေါ် အခြေခံ၍ ခွဲထုတ်စေပြီး ပိုသိပ်သည်းဆရှိသော အမှုန်များသည် နမူနာပြွန်၏ အောက်ခြေသို့ ရွေ့လျားသွားစေသည်။ ထို့ကြောင့် ပေါ့ပါးသော အမှုန်များသည် အပေါ်ဆုံးတွင် ရှိနေတတ်သည်။

DNA နှင့် ပရိုတင်းများကို ခွဲထုတ်ခြင်း၏ စိန်ခေါ်မှု

DNA နှင့် ပရိုတင်းများကို ခွဲထုတ်ရာတွင် မော်လီကျူးနှစ်ခုလုံးတွင် တူညီသော မော်လီကျူးအလေးချိန်များ ရှိသောကြောင့် ၎င်းသည် စိန်ခေါ်မှုတစ်ရပ်ကို ဖြစ်ပေါ်စေပါသည်။ ထိရောက်သော ခွဲထုတ်ခြင်းနည်းစနစ်မရှိဘဲ သန့်စင်သော DNA သို့မဟုတ် ပရိုတင်းနမူနာများ ရရှိရန် ခက်ခဲပါသည်။ သို့သော် centrifugation သည် ခွဲထုတ်ခြင်းလုပ်ငန်းစဉ်တွင် အထောက်အကူဖြစ်စေနိုင်သော်လည်း ၎င်းတစ်ခုတည်းဖြင့် မလုံလောက်ပါ။

၁။ ဒစ်ဖရန်ရှယ် ဆင့်ထရီဖူရှင်း- ကနဦးခွဲထုတ်ခြင်း

၂။ အလွန်ဗဟိုခွာခြင်း- မြှင့်တင်ထားသော ခွဲထုတ်ခြင်း

၃။ သိပ်သည်းဆ ချိန်ညှိစက်ဖြင့် ဗဟိုခွာခြင်း- လုပ်ငန်းစဉ်ကို ပိုမိုကောင်းမွန်အောင် ပြုလုပ်ခြင်း

၄။ ဘာဖာရွေးချယ်မှု၏ အရေးပါမှု

၅။ ဗဟိုခွာခြင်းနှင့် အခြားခွဲထုတ်ခြင်းနည်းစနစ်များ

ဒစ်ဖရန်ရှယ် ဆင့်ထရီဖျူးဂန့်: ကနဦး ခွဲထုတ်ခြင်း

DNA မှ ပရိုတင်းများကို ခွဲထုတ်ရာတွင် ပထမခြေလှမ်းမှာ ကွဲပြားသော centrifugation ဖြစ်သည်။ ဤနည်းလမ်းသည် ဆဲလ်အစိတ်အပိုင်းများကို ကျယ်ပြန့်စွာ ခွဲထုတ်နိုင်ရန်အတွက် မတူညီသော centrifugation အမြန်နှုန်းများကို အသုံးပြုသည်။ ဤလုပ်ငန်းစဉ်အတွင်း၊ တစ်ရှူးနမူနာများကို တစ်မိနစ်လျှင် လည်ပတ်မှု ၁၀၀၀ မှ ၅၀၀၀ (rpm) ခန့်ဖြင့် အနိမ့်ဆုံးအမြန်နှုန်း centrifugation ပြုလုပ်သည်။ ဤအနိမ့်ဆုံးအမြန်နှုန်းလည်ပတ်မှုသည် nuclei နှင့် implant ဆဲလ်များကို ခွဲထုတ်နိုင်စေပြီး ကြမ်းတမ်းသော အပိုင်းအစများဖြစ်ပေါ်စေသည်။ သို့သော် DNA နှင့် ပရိုတင်းများကို အပြည့်အဝခွဲထုတ်နိုင်ခြင်းမရှိပါ။

အလွန်ဗဟိုခွာခြင်း- မြှင့်တင်ထားသော ခွဲထုတ်ခြင်း

ကွဲပြားသော centrifugation ၏ ကန့်သတ်ချက်များကို ကျော်လွှားရန်အတွက်၊ ultracentrifugation သည် မြင်ကွင်းထဲသို့ ဝင်ရောက်လာသည်။ Ultracentrifuges များသည် 100,000 rpm အထိ အမြန်နှုန်းရောက်ရှိနိုင်သော မြန်နှုန်းမြင့် centrifuges များဖြစ်သည်။ ကနဦး အမြန်နှုန်းနိမ့် centrifugation မှ ရရှိသော ကုန်ကြမ်းအပိုင်းအစကို ultracentrifugation သို့ ပေးပို့ခြင်းဖြင့် DNA နှင့် ပရိုတင်းများအကြား မြင့်မားသော ခွဲခြားမှုကို ရရှိနိုင်မည်ဖြစ်သည်။ လေးလံသော DNA မော်လီကျူးများသည် ပြွန်၏အောက်ခြေသို့ စုပုံလာပြီး မြင်သာသော အလုံးလေးများ ဖွဲ့စည်းပေးသော်လည်း ပရိုတင်းများမှာ supernatant တွင် ရှိနေပါသည်။

သိပ်သည်းဆ ချိန်ညှိစက်ဖြင့် ဗဟိုခွာခြင်း- လုပ်ငန်းစဉ်ကို ပိုမိုကောင်းမွန်အောင် ပြုလုပ်ခြင်း

DNA နှင့် ပရိုတင်းများ ခွဲထုတ်ခြင်းကို ပိုမိုကောင်းမွန်စေရန်အတွက် သိပ်သည်းဆ gradient centrifugation ကို အသုံးပြုပါသည်။ ဤနည်းပညာတွင် sucrose သို့မဟုတ် cesium chloride ကဲ့သို့သော သိပ်သည်းဆ gradient medium ကို ပြင်ဆင်ထားသည်။ ဤ medium တွင် centrifuge ပြွန်၏ အပေါ်မှ အောက်ခြေအထိ တိုးလာသော သိပ်သည်းဆ အမျိုးမျိုး ပါဝင်သည်။ ယခင်အဆင့်မှ ရရှိသော ကုန်ကြမ်းအပိုင်းအစကို သိပ်သည်းဆ gradient ၏ ထိပ်တွင် ဂရုတစိုက် အလွှာလိုက် ဖုံးအုပ်ပြီး ultracentrifugation ကို ထပ်မံ ပြုလုပ်သည်။ DNA နှင့် ပရိုတင်းများသည် ၎င်းတို့၏ သိပ်သည်းဆများအပေါ် အခြေခံ၍ ခွဲထွက်ပြီး gradient အတွင်းတွင် ကွဲပြားသော band များကို ဖွဲ့စည်းသည်။ gradient ၏ fractionation သည် သန့်စင်သော DNA နှင့် ပရိုတင်းနမူနာများကို ပြန်လည်ရယူရန် ခွင့်ပြုသည်။

Buffer ရွေးချယ်မှုရဲ့ အရေးပါမှု

ဗဟိုခွာအားစနစ်အတွင်း အသုံးပြုသော ဘာဖာသည် ထိရောက်သော ခွဲထုတ်မှုရရှိရန် အရေးကြီးသော အခန်းကဏ္ဍမှ ပါဝင်သည်။ ၎င်းသည် ခွဲထုတ်နေသော မော်လီကျူးများ၏ တည်ငြိမ်မှုနှင့် သမာဓိကို သက်ရောက်မှုရှိသည်။ DNA အတွက်၊ pH 8.0 ရှိသော Tris-EDTA ဘာဖာကို DNA တည်ငြိမ်မှုကို ထိန်းသိမ်းနိုင်စွမ်းကြောင့် အသုံးများသည်။ အခြားတစ်ဖက်တွင်၊ ပရိုတင်းများသည် denaturation ကို ကာကွယ်ရန်နှင့် ၎င်းတို့၏ မူလဖွဲ့စည်းပုံကို ထိန်းသိမ်းရန်အတွက် သတ်မှတ်ထားသော pH အဆင့်များ၊ များသောအားဖြင့် 7.0 ဝန်းကျင်ရှိသော ဘာဖာများ လိုအပ်သည်။ သင့်လျော်သော ဘာဖာကို ရွေးချယ်ခြင်းသည် DNA နှင့် ပရိုတင်းများ၏ အရည်အသွေးကို မထိခိုက်စေဘဲ သင့်လျော်စွာ ခွဲထုတ်နိုင်စေပါသည်။

ဗဟိုခွာခြင်း နှင့် အခြားခွဲထုတ်ခြင်း နည်းစနစ်များ

DNA ကို ပရိုတင်းများမှ ခွဲထုတ်ရာတွင် centrifugation သည် ကျယ်ကျယ်ပြန့်ပြန့်အသုံးပြုသော နည်းစနစ်တစ်ခုဖြစ်သော်လည်း၊ ၎င်းသည် အသုံးပြုသော တစ်ခုတည်းသော နည်းလမ်းမဟုတ်ကြောင်း အသိအမှတ်ပြုရန် အရေးကြီးပါသည်။ chromatography၊ electrophoresis နှင့် precipitation ကဲ့သို့သော အခြားနည်းစနစ်များသည် ပိုမိုသန့်စင်သော ခွဲထုတ်မှုရရှိရန် centrifugation ကို ဖြည့်စွက်ပေးနိုင်ပါသည်။ နည်းစနစ်တစ်ခုစီတွင် ၎င်း၏ကိုယ်ပိုင် အားသာချက်များနှင့် ကန့်သတ်ချက်များရှိပြီး သုတေသီများသည် DNA နှင့် ပရိုတင်းများ၏ လိုချင်သော သန့်ရှင်းစင်ကြယ်မှုနှင့် ပြန်လည်ရယူမှုကို ရရှိရန် နည်းလမ်းများစွာကို မကြာခဏ ပေါင်းစပ်အသုံးပြုကြသည်။

နိဂုံးချုပ်

အဆုံးသတ်အနေနဲ့၊ centrifuge ဟာ DNA နဲ့ protein တွေကို ခွဲထုတ်ဖို့အတွက် အသုံးဝင်ပေမယ့် တခြားနည်းပညာတွေနဲ့ တွဲဖက်အသုံးပြုရင် အကောင်းဆုံးအလုပ်လုပ်ပါတယ်။ Differential centrifugation၊ ultracentrifugation နဲ့ density gradient centrifugation တွေဟာ ပိုမိုသန့်စင်တဲ့ နမူနာတွေရရှိဖို့ အထောက်အကူပြုတဲ့ ခွဲထုတ်မှုအဆင့်တွေကို ဖွဲ့စည်းပေးပါတယ်။ ထို့အပြင်၊ သင့်လျော်တဲ့ buffer တွေကို ရွေးချယ်ခြင်းနဲ့ အခြားခွဲထုတ်နည်းပညာတွေကို ထည့်သွင်းစဉ်းစားခြင်းဟာ DNA-protein ခွဲထုတ်မှုရဲ့ အလုံးစုံစွမ်းဆောင်ရည်ကို ပိုမိုမြှင့်တင်ပေးပါတယ်။