E vavae'ese ea e se centrifuge le dna mai polotini?

E mafai e se Centrifuge ona vavae'eseina le DNA mai porotini?

Fa'atomuaga

O le centrifugation o se metotia taua e faʻaaogaina lautele i suʻesuʻega faasaienisi ma fale suʻesuʻe faafomaʻi mo le vavaeʻeseina o vaega eseese o se faʻataʻitaʻiga e faʻavae i luga o lo latou mafiafia. O se tasi o faʻaoga masani o lenei metotia e aofia ai le vavaeʻeseina o le DNA ma porotini mai se faʻataʻitaʻiga faʻapitoa. I totonu o lenei tusiga, o le a matou suʻesuʻeina pe mafai e se centrifuge ona vavaeʻeseina lelei le DNA mai porotini ma suʻesuʻe loloto i auala eseese e faʻaaogaina e ausia ai le vavaeʻeseina lelei.

Malamalama i le Centrifugation

A'o le'i su'esu'eina fa'amatalaga patino o le vavae'eseina o le DNA mai porotini e fa'aaoga ai se centrifuge, e taua le malamalama i mataupu fa'avae autū o le centrifugation. E fa'agaoioia le centrifuge i luga o le mataupu fa'avae o le sedimentation ma fa'aaogaina le viliina saoasaoa maualuga e fausia ai se malosi malosi o le centrifugal. O lenei malosi e mafua ai ona vavae'ese vaega i totonu o se fa'ata'ita'iga e fa'atatau i lo latou mafiafia, fa'atasi ai ma vaega mafiafia e agai atu i le pito i lalo o le paipa fa'ata'ita'iga. O le i'uga, o vaega mama e masani ona tumau i le pito i luga.

O le Lu'itau o le Vavae'eseina o le DNA ma Porotini

A oʻo i le vaevaeina o le DNA ma porotini, e faigata ona maua ni faʻataʻitaʻiga o le DNA poʻo porotini mama pe a oʻo i le vaevaeina, ae atonu e le lava lea pe a na o ia.

1. Fa'aputuga Eseese: Vavae'esega Muamua

2. Ultracentrifugation: Fa'aleleia le Vavae'eseina

3. Fa'aputuga o le Fa'asoloatoa o le Mamafa: Fa'aleleia atili o le Fa'agasologa

4. Taua o le Filifiliga o le Buffer

5. Fa'aputuga e fa'atusatusa i isi metotia vavae'ese

Fa'aputuga Eseesega: Vavae'esega Muamua

O le fa'aputuga eseese o le la'asaga muamua lea i le vavae'eseina o le DNA mai porotini. O lenei metotia e fa'aaogaina ai saoasaoa eseese o le fa'aputuga e ausia ai se vavae'esega lautele o vaega o le sela. I le taimi o lenei faiga, o sela ua fa'afefiloi pe fa'ata'ita'iga o a'ano e fa'atinoina ai le fa'aputuga maualalo le saoasaoa, e masani lava pe tusa ma le 1000-5000 ta'amilosaga i le minute (rpm). O lenei vili maualalo le saoasaoa e mafai ai ona vavae'ese nuclei ma sela e le'i a'afia, e o'o atu ai i se vaevaega mata'utia. Peita'i, e le maua ai se vavae'esega atoatoa o le DNA ma porotini.

Ultracentrifugation: Fa'aleleia le Vavae'eseina

Ina ia foia tapula'a o le differential centrifugation, e fa'aaogaina ai le ultracentrifugation. O Ultracentrifuges o ni centrifuges e vave ona o'o atu i le saoasaoa e o'o atu i le 100,000 rpm. O le fa'aaogaina o le vaega mata na maua mai le centrifugation maualalo muamua i le ultracentrifugation, e mafai ai ona ausia se tulaga maualuga o le vaeluaga i le va o le DNA ma porotini. O molela'au mamafa o le DNA e fa'aputu i le pito i lalo o le paipa, ma fausia ai se pellet vaaia, a'o tumau pea porotini i totonu o le supernatant.

Fa'aputuga o le Fa'asoloatoa o le Density: Fa'aleleia atili o le Fa'agasologa

Mo le fa'aleleia atili o le vavae'eseina o le DNA ma porotini, e fa'aaogaina ai le density gradient centrifugation. I lenei metotia, e saunia ai se density gradient medium, e pei o le sucrose po'o le cesium chloride. O lenei medium e aofia ai le tele o densitys, e fa'ateleina mai luga i le pito i lalo o le centrifuge tube. O le vaega mata na maua mai le la'asaga muamua e fa'apipi'i ma le fa'aeteete i luga o le density gradient ma toe faia i le ultracentrifugation. E vavae'ese le DNA ma porotini e fa'atatau i o latou density ma fausia ai ni fusi eseese i totonu o le gradient. O le fractionation o le gradient e mafai ai ona toe maua mai fa'ata'ita'iga o le DNA mama ma porotini.

Taua o le Filifiliga o le Buffer

O le buffer e faʻaaogaina i le taimi o le centrifugation e taua tele i le ausiaina o le vavaeʻeseina lelei. E aʻafia ai le mautu ma le saʻo o molecules o loʻo vavaeʻeseina. Mo le DNA, o le Tris-EDTA buffer e 8.0 le pH e masani ona faʻaaogaina ona o lona gafatia e faʻatumauina ai le mautu o le DNA. I le isi itu, o porotini e manaʻomia ni buffer e iai ni pH faʻapitoa, e masani lava pe tusa ma le 7.0, e puipuia ai le denaturation ma faʻatumauina ai lo latou fausaga masani. O le filifilia o le buffer talafeagai e faʻamautinoa ai le vavaeʻeseina lelei o le DNA ma porotini e aunoa ma le faʻaleagaina o lo latou lelei.

Centrifugation e fa'atusatusa i isi metotia vavae'ese

E ui o le centrifugation o se metotia e faʻaaogaina lautele i le vavaeʻeseina o le DNA mai porotini, ae e taua le iloa atonu e le na o le pau lea o le metotia e faʻaaogaina. O isi metotia, e pei o le chromatography, electrophoresis, ma le precipitation, e mafai ona faʻaopoopo i le centrifugation e ausia ai se vavaeʻesega sili atu ona lelei. O metotia taʻitasi e iai ona lava lelei ma ona tapulaʻa, ma e masani ona tuʻufaʻatasia e le au suʻesuʻe le tele o metotia e maua ai le mama ma le toe faʻaleleia o le DNA ma porotini.

Faaiuga

I le faaiuga, e ui o le centrifuge e aoga moni lava mo le vavaeeseina o le DNA mai porotini, ae e sili ona aoga pe a faaaogaina faatasi ma isi metotia. O le differential centrifugation, ultracentrifugation, ma le density gradient centrifugation e fausia ai se faasologa o laasaga vavaeeseina e fesoasoani i le mauaina o faataitaiga mama. E le gata i lea, o le filifilia o buffers talafeagai ma le mafaufau i isi metotia vavaeeseina e faaleleia atili ai le aoga atoa o le vavaeeseina o le DNA-porotini.