Лизосомыг пероксисомоос хэрхэн салгах вэ (центрифугээр)

Лизосом ба пероксисомын танилцуулга

Лизосом ба пероксисом нь эсийн бодисын солилцоо болон гомеостазд чухал үүрэг гүйцэтгэдэг өөр өөр үүрэг гүйцэтгэдэг хоёр тусдаа эсийн органелл юм. Лизосом нь эсийн хаягдал материал, гадны бөөмс, эмгэг төрүүлэгчдийг задлах үүрэгтэй хоол боловсруулах ферментээр дүүргэгдсэн мембрантай холбогдсон органелл юм. Нөгөөтэйгүүр, пероксисом нь янз бүрийн бодисын солилцооны урвалд оролцдог, ялангуяа хоргүйжүүлэх, липидийн солилцоотой холбоотой урвалд оролцдог. Эдгээр органеллуудыг тусад нь судлахын тулд түгээмэл хэрэглэгддэг нэг арга бол центрифуг юм. Энэ нийтлэлд бид лизосомыг пероксисомоос амжилттай салгахын тулд центрифугийг хэрхэн ашиглаж болохыг судлах болно.

Центрифугийн зарчим ба техникүүд

Центрифуг нь хэмжээ, нягтрал, хэлбэрээс нь хамааран олон төрлийн хольцын янз бүрийн бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг ялгахад ашигладаг хүчирхэг арга юм. Энэ нь төвөөс зугтах хүчний нөлөөн дор хүнд хэсгүүд илүү хурдан суурьшдаг тунадасжуулалтын зарчим дээр ажилладаг. Лизосомыг пероксисомоос салгахын тулд дифференциал центрифуг болон нягтралын градиент центрифуг зэрэг центрифугийн өөр өөр аргыг ашиглаж болно.

Дифференциал центрифугжилт: Лизосом ба пероксисомыг гаргаж авах

Дифференциал центрифугжилт нь нягтралаас нь хамааран органеллуудыг ялгахын тулд янз бүрийн хурд, хугацаагаар центрифугийн цуврал алхмуудыг агуулдаг. Үүнийг лизосом ба пероксисомыг гаргаж авахад хэрхэн ашиглаж болохыг энд харуулав.

Алхам 1: Нэгэн төрлийн болгох

Эхний алхам бол эсүүдийг зөөлөн хагалж, тэдгээрийн агуулгыг гомогенжүүлэх арга ашиглан гаргах явдал юм. Үүнийг хэт авиагаар эсвэл тусгай гомогенжуулагч ашиглан хийж болно. Үүссэн хольцыг гомогенат гэж нэрлэдэг.

Алхам 2: Бага хурдтай центрифугжилт

Дараа нь гомогенатыг богино хугацаанд бага хурдтай центрифугт (ойролцоогоор 1,000-2,000 xg) оруулна. Энэ алхам нь гомогенатад байгаа бусад эрхтэнээс том эсийн хог хаягдал болон цөмийн фракцыг салгахад тусалдаг.

Алхам 3: Дунд хурдтай центрифугжилт

Бага хурдтай центрифугийн шатнаас гаргаж авсан дээд давхаргыг дунд хурдтай центрифугт (ойролцоогоор 10,000 xg) оруулж, лизосом ба пероксисом зэрэг хүнд органеллуудыг тунадасжуулна. Энэ алхам нь эдгээр органеллуудыг агуулсан үрэл үүсгэдэг.

Алхам 4: Угааж, дахин түрхэнэ

Өмнөх алхамд гаргаж авсан үрлэнг тохиромжтой буфержуулсан уусмалаар угааж, дараа нь цэвэршүүлсэн лизосом ба пероксисомын фракцыг гарган авахын тулд дахин уусгана.

Нягт градиентийн центрифугжилт: Ялгаалтыг цэвэршүүлэх

Нягт градиент центрифуг нь лизосом ба пероксисомыг цаашид цэвэршүүлэх, сайжруулах боломжийг олгодог дэвшилтэт центрифугийн арга юм. Энэ аргаар нягтралын градиентийг сахароз эсвэл иодиксанол зэрэг градиент үүсгэгч уусмал ашиглан үүсгэдэг. Үүнийг хэрхэн ашиглаж болохыг энд харуулав.

Алхам 1: Нягтралын градиент бэлтгэх

Сахароз гэх мэт нягтралын градиент орчинг центрифугийн хоолойд бэлтгэдэг бөгөөд дээрээс доош эсвэл доороос дээш нягтрал нь харилцан адилгүй байдаг. Градиент орчны найрлага, нягтралыг сайтар сонгож, пероксисомоос хөнгөн боловч лизосомоос нягт байхыг баталгаажуулдаг.

Алхам 2: Дээжийг давхарлах

Дифференциал центрифугээр гаргаж авсан дахин суспензлэгдсэн лизосом ба пероксисомын фракцийг нягтралын градиент орчин дээр болгоомжтой давхарлаж байрлуулна.

Алхам 3: Центрифугжилт

Дараа нь хоолойг өндөр хурдтай центрифугээр (хэт центрифугээр) фокусжуулж, лизосом ба пероксисомыг хөвөх нягтралаас нь хамааруулан ялгадаг. Центрифугийн үед органеллууд нь хөвөх нягтрал нь хүрээлэн буй орчны нягтралтай тохирч буй хэсэгт хүрэх хүртэл орчин дундуур хөдөлж, тодорхой зурвас үүсгэдэг.

Шинжилгээ ба цаашдын хэрэглээ

Амжилттай салгасны дараа олж авсан лизосом ба пероксисомын фракцуудыг цэвэршилт, хэмжээ, найрлага, үйл ажиллагааны шинж чанарыг үнэлэхийн тулд янз бүрийн аргыг ашиглан цаашид шинжилж болно. Электрон микроскоп, иммуноцитохими, ферментийн идэвхжилийн шинжилгээ зэрэг аргууд нь тусгаарлагдсан фракцуудын талаар үнэ цэнэтэй ойлголт өгч, тэдгээрийн өвөрмөц байдал, цэвэр байдлыг баталгаажуулж чадна.

Судалгааны зорилгоос гадна лизосом ба пероксисомыг центрифугээр ялгах чадвар нь анагаах ухааны оношлогоо, эмийн хөгжил, эмчилгээний оролцоонд хэрэглэгддэг. Эдгээр эрхтэний үйл ажиллагааг илүү сайн ойлгосноор эрдэмтэд лизосом хадгалах өвчин эсвэл пероксисом биогенезийн эмгэг зэрэг лизосом эсвэл пероксисомын эмгэгийг чиглэсэн шинэ эмчилгээний стратегиудыг судлах боломжтой.

Эцэст нь хэлэхэд, дифференциал центрифуг болон нягтралын градиент центрифуг зэрэг центрифугийн техник ашиглан лизосомыг пероксисомоос салгах нь эсийн биологийн судалгаанд чухал арга юм. Эдгээр аргууд нь эрдэмтдэд лизосом ба пероксисомын цэвэршүүлсэн фракцуудыг гаргаж авах боломжийг олгодог бөгөөд энэ нь тэдгээрийн бие даасан үүрэг, бодисын солилцооны зам, холбогдох өвчний эмчилгээний боломжит арга хэмжээг ойлгоход тусалдаг.