របៀបបំបែក lysosomes ពី peroxisomes ដោយ centrifugation
សេចក្តីផ្តើមអំពីលីសូសូម និង ពែរ៉ុកស៊ីសូម
លីសូសូម និង ពែរ៉ុកស៊ីសូម គឺជាសរីរាង្គកោសិកាពីរដាច់ដោយឡែកពីគ្នា ដែលមានមុខងារខុសៗគ្នា ដែលដើរតួនាទីយ៉ាងសំខាន់ក្នុងការរំលាយអាហារកោសិកា និង homeostasis។ លីសូសូម គឺជាសរីរាង្គដែលចងភ្ជាប់នឹងភ្នាសកោសិកា ដែលពោរពេញទៅដោយអង់ស៊ីមរំលាយអាហារ ដែលទទួលខុសត្រូវចំពោះការបំបែកសារធាតុកាកសំណល់កោសិកា ភាគល្អិតបរទេស និងភ្នាក់ងារបង្ករោគ។ ម្យ៉ាងវិញទៀត ពែរ៉ុកស៊ីសូម ពាក់ព័ន្ធនឹងប្រតិកម្មមេតាបូលីសផ្សេងៗ ជាពិសេសប្រតិកម្មដែលទាក់ទងនឹងការបន្សាបជាតិពុល និងការរំលាយអាហារ lipid។ ដើម្បីសិក្សាពីសរីរាង្គទាំងនេះដោយឡែកពីគ្នា វិធីសាស្ត្រមួយដែលត្រូវបានគេប្រើជាទូទៅគឺ centrifugation។ នៅក្នុងអត្ថបទនេះ យើងនឹងស្វែងយល់ពីរបៀបដែល centrifugation អាចត្រូវបានប្រើប្រាស់ដើម្បីបំបែក lysosomes ពី peroxisomes ដោយជោគជ័យ។
គោលការណ៍ និងបច្ចេកទេសនៃការបង្វិលកណ្តាល
ការបង្វិលជុំគឺជាបច្ចេកទេសដ៏មានឥទ្ធិពលមួយដែលប្រើដើម្បីបំបែកសមាសធាតុផ្សេងៗគ្នានៃល្បាយចម្រុះដោយផ្អែកលើទំហំ ដង់ស៊ីតេ និងរូបរាងរបស់វា។ វាដំណើរការលើគោលការណ៍នៃការធ្លាក់ដី ដែលភាគល្អិតធ្ងន់ៗតាំងលំនៅលឿនជាងមុនក្រោមឥទ្ធិពលនៃកម្លាំងបង្វិលជុំ។ ដើម្បីបំបែកលីសូសូមពីប៉េរ៉ុកស៊ីសូម បច្ចេកទេសបង្វិលជុំផ្សេងៗគ្នា ដូចជាការបង្វិលជុំឌីផេរ៉ង់ស្យែល និងការបង្វិលជុំជម្រាលដង់ស៊ីតេ អាចត្រូវបានប្រើ។
ការបង្វិលឌីផេរ៉ង់ស្យែល៖ ការស្រង់ចេញលីសូសូម និងប៉េរ៉ុកស៊ីសូម
ការបង្វិលឌីផេរ៉ង់ស្យែលពាក់ព័ន្ធនឹងជំហានបង្វិលជាបន្តបន្ទាប់ក្នុងល្បឿន និងរយៈពេលខុសៗគ្នា ដើម្បីបំបែកសរីរាង្គដោយផ្អែកលើដង់ស៊ីតេរបស់វា។ នេះជារបៀបដែលវាអាចត្រូវបានប្រើដើម្បីទាញយកលីសូសូម និងប៉េរ៉ុកស៊ីសូម៖
ជំហានទី 1: ភាពដូចគ្នា
ជំហានដំបូងគឺត្រូវបំបែកកោសិកាថ្នមៗ ហើយបញ្ចេញមាតិការបស់វាដោយប្រើបច្ចេកទេសធ្វើឱ្យដូចគ្នា (homogenization)។ នេះអាចសម្រេចបានដោយការធ្វើឱ្យដូចគ្នាដោយសំឡេង ឬប្រើឧបករណ៍ធ្វើឱ្យដូចគ្នាដែលមានជំនាញ។ ល្បាយលទ្ធផលត្រូវបានគេហៅថា homogenate។
ជំហានទី 2: ការបង្វិលក្នុងល្បឿនទាប
បន្ទាប់មក សារធាតុ homogenate ត្រូវបានទទួលរងនូវការបង្វិលក្នុងល្បឿនទាប (ប្រហែល 1,000-2,000 xg) ក្នុងរយៈពេលខ្លី។ ជំហាននេះជួយបំបែកកំទេចកំទីកោសិកាធំៗ និងប្រភាគនុយក្លេអ៊ែរចេញពីសរីរាង្គដែលនៅសល់ដែលមាននៅក្នុងសារធាតុ homogenate។
ជំហានទី 3: ការបង្វិលកណ្តាលល្បឿនមធ្យម
សារធាតុរាវខាងលើដែលទទួលបានពីជំហានបង្វិលក្នុងល្បឿនទាប ត្រូវបានទទួលរងនូវការបង្វិលក្នុងល្បឿនមធ្យម (ប្រហែល 10,000 xg) ទៅកាន់សរីរាង្គធ្ងន់ៗដូចជា លីសូសូម និង ពែរ៉ុកស៊ីសូម។ ជំហាននេះបណ្តាលឱ្យមានគ្រាប់ដែលមានសរីរាង្គទាំងនេះ។
ជំហានទី 4: លាងសម្អាត និងលាបឡើងវិញ
គ្រាប់ដែលទទួលបាននៅជំហានមុនត្រូវបានលាងសម្អាតដោយទឹកថ្នាំដែលមានសារធាតុបម្រុងសមស្រប ហើយបន្ទាប់មករលាយឡើងវិញដើម្បីទទួលបានប្រភាគលីសូសូម និងប៉េរ៉ុកស៊ីសូមដែលបានបន្សុទ្ធ។
ការបង្វិលដង់ស៊ីតេជម្រាល៖ ការចម្រាញ់ការបំបែក
ការបង្វិលជម្រាលដង់ស៊ីតេ គឺជាបច្ចេកទេសបង្វិលកម្រិតខ្ពស់ ដែលអនុញ្ញាតឱ្យមានការបន្សុទ្ធ និងកែលម្អបន្ថែមទៀតនៃ lysosomes និង peroxisomes។ នៅក្នុងបច្ចេកទេសនេះ ជម្រាលដង់ស៊ីតេត្រូវបានបង្កើតឡើងដោយប្រើដំណោះស្រាយបង្កើតជម្រាលដូចជា sucrose ឬ iodixanol។ នេះជារបៀបដែលវាអាចត្រូវបានអនុវត្ត៖
ជំហានទី 1: ការរៀបចំជម្រាលដង់ស៊ីតេ
ឧបករណ៍សម្រួលជម្រាលដង់ស៊ីតេ ដូចជាស៊ុយក្រូស ត្រូវបានរៀបចំក្នុងបំពង់បង្វិលដែលមានដង់ស៊ីតេខុសៗគ្នាពីលើចុះក្រោម ឬពីលើចុះក្រោម។ សមាសភាព និងដង់ស៊ីតេនៃឧបករណ៍សម្រួលជម្រាលត្រូវបានជ្រើសរើសយ៉ាងប្រុងប្រយ័ត្ន ដោយធានាថាវាស្រាលជាងពែរ៉ុកស៊ីសូម ប៉ុន្តែក្រាស់ជាងលីសូសូម។
ជំហានទី 2: ការដាក់ស្រទាប់គំរូ
ប្រភាគ lysosome និង peroxisome ដែលបានរំលាយឡើងវិញ ដែលទទួលបានពីការ centrifugation ឌីផេរ៉ង់ស្យែល ត្រូវបានដាក់ជាស្រទាប់ៗដោយប្រុងប្រយ័ត្ននៅផ្នែកខាងលើនៃឧបករណ៍ផ្ទុកដង់ស៊ីតេ។
ជំហានទី 3: ការបង្វិលកណ្តាល
បន្ទាប់មក បំពង់នេះត្រូវបានទទួលរងនូវការបង្វិលក្នុងល្បឿនលឿន (អ៊ុលត្រាបង្វិល) ដើម្បីបំបែកលីសូសូម និងពែរ៉ុកស៊ីសូមដោយផ្អែកលើដង់ស៊ីតេអណ្តែតរបស់វា។ ក្នុងអំឡុងពេលបង្វិល សរីរាង្គផ្លាស់ទីឆ្លងកាត់ឧបករណ៍ផ្ទុករហូតដល់ពួកវាទៅដល់តំបន់ដែលដង់ស៊ីតេអណ្តែតរបស់វាត្រូវគ្នានឹងដង់ស៊ីតេនៃឧបករណ៍ផ្ទុកជុំវិញ ដោយបង្កើតជាក្រុមផ្សេងៗគ្នា។
ការវិភាគ និងការអនុវត្តបន្ថែម
បន្ទាប់ពីការបំបែកដោយជោគជ័យ ប្រភាគលីសូសូម និងប៉េរ៉ុកស៊ីសូមដែលទទួលបានអាចត្រូវបានវិភាគបន្ថែមទៀតដោយប្រើបច្ចេកទេសផ្សេងៗ ដើម្បីវាយតម្លៃភាពបរិសុទ្ធ ទំហំ សមាសភាព និងលក្ខណៈសម្បត្តិមុខងាររបស់វា។ បច្ចេកទេសដូចជាមីក្រូទស្សន៍អេឡិចត្រុង អ៊ីមម៉ូណូស៊ីតូគីមីវិទ្យា និងការវាស់ស្ទង់សកម្មភាពអង់ស៊ីម អាចផ្តល់នូវការយល់ដឹងដ៏មានតម្លៃទៅលើប្រភាគដាច់ដោយឡែក ដែលបញ្ជាក់ពីអត្តសញ្ញាណ និងភាពបរិសុទ្ធរបស់វា។
ក្រៅពីគោលបំណងស្រាវជ្រាវ សមត្ថភាពក្នុងការបំបែកលីសូសូម និងពែរ៉ុកស៊ីសូមតាមរយៈការបង្វិលកោសិកាមានការអនុវត្តក្នុងការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យវេជ្ជសាស្ត្រ ការអភិវឌ្ឍថ្នាំ និងអន្តរាគមន៍ព្យាបាល។ តាមរយៈការយល់ដឹងកាន់តែច្បាស់អំពីមុខងាររបស់សរីរាង្គទាំងនេះ អ្នកវិទ្យាសាស្ត្រអាចស្វែងយល់ពីយុទ្ធសាស្ត្រព្យាបាលថ្មីៗដែលផ្តោតលើជំងឺលីសូសូម ឬពែរ៉ុកស៊ីសូម ដូចជាជំងឺស្តុកទុកលីសូសូម ឬជំងឺជីវសាស្ត្រពែរ៉ុកស៊ីសូម។
សរុបមក ការបំបែកលីសូសូមចេញពីប៉េរ៉ុកស៊ីសូមដោយប្រើបច្ចេកទេស centrifugation ដូចជា centrifugation ឌីផេរ៉ង់ស្យែល និង centrifugation ជម្រាលដង់ស៊ីតេ គឺជាវិធីសាស្រ្តសំខាន់មួយក្នុងការស្រាវជ្រាវជីវវិទ្យាកោសិកា។ បច្ចេកទេសទាំងនេះអាចឱ្យអ្នកវិទ្យាសាស្ត្រទទួលបានប្រភាគបរិសុទ្ធនៃលីសូសូម និងប៉េរ៉ុកស៊ីសូម ដែលជួយក្នុងការយល់ដឹងអំពីតួនាទីនីមួយៗរបស់វា ផ្លូវមេតាប៉ូលីស និងអន្តរាគមន៍ព្យាបាលដែលមានសក្តានុពលសម្រាប់ជំងឺពាក់ព័ន្ធ។
។