ວິທີການແຍກ lysosomes ອອກຈາກ peroxisomes centrifugation

ການແນະນຳກ່ຽວກັບ Lysosomes ແລະ Peroxisomes

ໄລໂຊໂຊມ ແລະ ເປີອົກຊີໂຊມ ແມ່ນອໍແກນິກຂອງຈຸລັງສອງຊະນິດທີ່ແຍກຕ່າງຫາກທີ່ມີໜ້າທີ່ທີ່ແຕກຕ່າງກັນ ເຊິ່ງມີບົດບາດສຳຄັນໃນການເຜົາຜານອາຫານຂອງຈຸລັງ ແລະ ສະພາບປົກກະຕິຂອງຈຸລັງ. ໄລໂຊໂຊມ ແມ່ນອໍແກນິກທີ່ຜູກມັດກັບເຍື່ອຫຸ້ມເຊວ ທີ່ເຕັມໄປດ້ວຍເອນໄຊຍ່ອຍອາຫານທີ່ມີໜ້າທີ່ທຳລາຍສິ່ງເສດເຫຼືອຂອງຈຸລັງ, ອະນຸພາກຕ່າງປະເທດ ແລະ ເຊື້ອພະຍາດ. ໃນທາງກົງກັນຂ້າມ, ເປີອົກຊີໂຊມ ມີສ່ວນຮ່ວມໃນປະຕິກິລິຍາການເຜົາຜານອາຫານຕ່າງໆ, ໂດຍສະເພາະແມ່ນປະຕິກິລິຍາທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບການຂັບສານພິດ ແລະ ການເຜົາຜານໄຂມັນ. ເພື່ອສຶກສາອໍແກນິກເຫຼົ່ານີ້ແຍກຕ່າງຫາກ, ວິທີການໜຶ່ງທີ່ນິຍົມໃຊ້ແມ່ນການປั่นແຍກ. ໃນບົດຄວາມນີ້, ພວກເຮົາຈະຄົ້ນຫາວິທີການທີ່ການປั่นແຍກສາມາດນຳໃຊ້ເພື່ອແຍກໄລໂຊໂຊມອອກຈາກເປີອົກຊີໂຊມໄດ້ຢ່າງສຳເລັດຜົນ.

ຫຼັກການ ແລະ ເຕັກນິກການປั่นແຍກ

ການປั่นແຍກສ່ວນເປັນເຕັກນິກທີ່ມີປະສິດທິພາບທີ່ໃຊ້ເພື່ອແຍກສ່ວນປະກອບຕ່າງໆຂອງສ່ວນປະສົມທີ່ບໍ່ເປັນເອກະພາບໂດຍອີງໃສ່ຂະໜາດ, ຄວາມໜາແໜ້ນ ແລະ ຮູບຮ່າງຂອງມັນ. ມັນເຮັດວຽກບົນຫຼັກການຂອງການຕົກຕະກອນ, ບ່ອນທີ່ອະນຸພາກທີ່ໜັກກວ່າຈະຕົກຕະກອນໄວຂຶ້ນພາຍໃຕ້ອິດທິພົນຂອງແຮງໜີສູນກາງ. ເພື່ອແຍກໄລໂຊໂຊມອອກຈາກເປີອົກຊີໂຊມ, ເຕັກນິກການປั่นແຍກສ່ວນທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ເຊັ່ນ: ການປั่นແຍກສ່ວນແບບດິຟເຟີເຣນຊຽລ ແລະ ການປั่นແຍກສ່ວນແບບຄວາມໜາແໜ້ນ, ສາມາດນຳໃຊ້ໄດ້.

ການປั่นແຍກແບບດິບເຟີເຣນຊຽລ: ການສະກັດເອົາໄລໂຊໂຊມ ແລະ ເປີຣອກຊີໂຊມ

ການປั่นແຍກແບບດິບເຟີເຣນຊຽລກ່ຽວຂ້ອງກັບຊຸດຂອງຂັ້ນຕອນການປั่นແຍກດ້ວຍຄວາມໄວ ແລະ ໄລຍະເວລາທີ່ແຕກຕ່າງກັນເພື່ອແຍກອໍແກແນລໂດຍອີງໃສ່ຄວາມໜາແໜ້ນຂອງມັນ. ນີ້ແມ່ນວິທີທີ່ມັນສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອສະກັດ lysosomes ແລະ peroxisomes:

ຂັ້ນຕອນທີ 1: ການເຮັດໃຫ້ເປັນເອກະພາບ

ຂັ້ນຕອນທຳອິດແມ່ນການຄ່ອຍໆແຍກຈຸລັງອອກ ແລະ ປ່ອຍເນື້ອໃນຂອງມັນອອກໂດຍໃຊ້ເຕັກນິກການເຮັດໃຫ້ເປັນເນື້ອດຽວກັນ. ສິ່ງນີ້ສາມາດເຮັດໄດ້ໂດຍການສັ່ນສະເທືອນດ້ວຍສຽງ ຫຼື ການໃຊ້ເຄື່ອງເຮັດໃຫ້ເປັນເນື້ອດຽວກັນແບບພິເສດ. ສ່ວນປະສົມທີ່ໄດ້ຮັບເອີ້ນວ່າ homogenate.

ຂັ້ນຕອນທີ 2: ການປั่นແຍກຄວາມໄວຕ່ຳ

ຫຼັງຈາກນັ້ນ, homogenate ຈະຖືກນຳໄປໃຊ້ການປั่นແຍກຄວາມໄວຕ່ຳ (ປະມານ 1,000-2,000 xg) ເປັນໄລຍະເວລາສັ້ນໆ. ຂັ້ນຕອນນີ້ຊ່ວຍແຍກເສດຈຸລັງຂະໜາດໃຫຍ່ ແລະ ສ່ວນປະກອບຂອງນິວເຄຼຍອອກຈາກອະໄວຍະວະທີ່ເຫຼືອທີ່ມີຢູ່ໃນ homogenate.

ຂັ້ນຕອນທີ 3: ການປั่นແຍກຄວາມໄວປານກາງ

ນ້ຳໃສທີ່ໄດ້ຮັບຈາກຂັ້ນຕອນການປั่นແຍກດ້ວຍຄວາມໄວຕ່ຳແມ່ນໄດ້ຮັບການປั่นແຍກດ້ວຍຄວາມໄວປານກາງ (ປະມານ 10,000 xg) ຕໍ່ກັບອໍແກນິກໜັກທີ່ເປັນຕະກອນເຊັ່ນ: ໄລໂຊໂຊມ ແລະ ເປີອົກຊີໂຊມ. ຂັ້ນຕອນນີ້ເຮັດໃຫ້ເກີດເມັດທີ່ມີອໍແກນິກເຫຼົ່ານີ້.

ຂັ້ນຕອນທີ 4: ລ້າງ ແລະ ແຊ່ນ້ຳຢາຄືນໃໝ່

ເມັດທີ່ໄດ້ຮັບໃນຂັ້ນຕອນກ່ອນໜ້ານີ້ຖືກລ້າງດ້ວຍສານລະລາຍທີ່ມີບັຟເຟີທີ່ເໝາະສົມ ແລະ ຫຼັງຈາກນັ້ນກໍ່ຖືກລະລາຍຄືນໃໝ່ເພື່ອໃຫ້ໄດ້ສ່ວນ lysosome ແລະ peroxisome ທີ່ບໍລິສຸດ.

ການປั่นແຍກຄວາມໜາແໜ້ນ: ການປັບປຸງການແຍກ

ການປั่นແຍກຄວາມໜາແໜ້ນແບບ density gradient ເປັນເຕັກນິກການປั่นແຍກທີ່ກ້າວໜ້າເຊິ່ງຊ່ວຍໃຫ້ການບໍລິສຸດ ແລະ ການປັບປຸງ lysosomes ແລະ peroxisomes ຕື່ມອີກ. ໃນເຕັກນິກນີ້, ການປ່ຽນແປງຄວາມໜາແໜ້ນແມ່ນສ້າງຂຶ້ນໂດຍໃຊ້ສານລະລາຍທີ່ສ້າງການປ່ຽນແປງເຊັ່ນ: sucrose ຫຼື iodixanol. ນີ້ແມ່ນວິທີການນຳໃຊ້:

ຂັ້ນຕອນທີ 1: ການກະກຽມຄວາມໜາແໜ້ນຂອງ Gradient

ຕົວກາງທີ່ມີຄວາມໜາແໜ້ນແຕກຕ່າງກັນ ເຊັ່ນ: ຊູໂຄຣສ ຖືກກະກຽມໃນທໍ່ປั่นແຍກ ໂດຍມີຄວາມໜາແໜ້ນແຕກຕ່າງກັນຈາກເທິງຫາລຸ່ມ ຫຼື ຈາກລຸ່ມຫາເທິງ. ສ່ວນປະກອບ ແລະ ຄວາມໜາແໜ້ນຂອງຕົວກາງທີ່ມີຄວາມໜາແໜ້ນແມ່ນຖືກຄັດເລືອກຢ່າງລະມັດລະວັງ ເພື່ອຮັບປະກັນວ່າມັນມີນ້ຳໜັກເບົາກວ່າເປີອົກຊີໂຊມ ແຕ່ມີຄວາມໜາແໜ້ນກວ່າໄລໂຊໂຊມ.

ຂັ້ນຕອນທີ 2: ການວາງຊັ້ນຂອງຕົວຢ່າງ

ສ່ວນປະກອບຂອງ lysosome ແລະ peroxisome ທີ່ຖືກລະລາຍຄືນໃໝ່ທີ່ໄດ້ມາຈາກການປั่นແຍກແບບດິຟເຟີເຣນຊຽລແມ່ນຖືກຈັດຊັ້ນຢ່າງລະມັດລະວັງຢູ່ເທິງສຸດຂອງຕົວກາງທີ່ມີຄວາມໜາແໜ້ນ.

ຂັ້ນຕອນທີ 3: ການປั่นແຍກ

ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ທໍ່ດັ່ງກ່າວຈະຖືກນຳໄປປະຫວດດ້ວຍຄວາມໄວສູງ (ultracentrifugation) ເພື່ອແຍກ lysosomes ແລະ peroxisomes ໂດຍອີງໃສ່ຄວາມໜາແໜ້ນທີ່ລອຍຕົວຂອງມັນ. ໃນລະຫວ່າງການປະຫວດ, organelles ຈະເຄື່ອນທີ່ຜ່ານຕົວກາງຈົນກວ່າພວກມັນຈະຮອດພາກພື້ນທີ່ຄວາມໜາແໜ້ນທີ່ລອຍຕົວຂອງມັນກົງກັບຄວາມໜາແໜ້ນຂອງຕົວກາງອ້ອມຂ້າງ, ປະກອບເປັນແຖບທີ່ແຕກຕ່າງກັນ.

ການວິເຄາະ ແລະ ການນຳໃຊ້ເພີ່ມເຕີມ

ຫຼັງຈາກການແຍກຕົວສຳເລັດແລ້ວ, ສ່ວນປະກອບ lysosome ແລະ peroxisome ທີ່ໄດ້ຮັບສາມາດວິເຄາະຕື່ມອີກໄດ້ໂດຍໃຊ້ເຕັກນິກຕ່າງໆເພື່ອປະເມີນຄວາມບໍລິສຸດ, ຂະໜາດ, ສ່ວນປະກອບ ແລະ ຄຸນສົມບັດທາງດ້ານໜ້າທີ່ຂອງມັນ. ເຕັກນິກຕ່າງໆເຊັ່ນ: ກ້ອງຈຸລະທັດເອເລັກໂຕຣນ, ພູມຕ້ານທານໄຊໂຕເຄມີ, ແລະ ການທົດສອບກິດຈະກຳຂອງເອນໄຊມ໌ສາມາດໃຫ້ຄວາມເຂົ້າໃຈທີ່ມີຄຸນຄ່າກ່ຽວກັບສ່ວນປະກອບທີ່ແຍກອອກມາ, ຢືນຢັນຕົວຕົນ ແລະ ຄວາມບໍລິສຸດຂອງມັນ.

ນອກເໜືອໄປຈາກຈຸດປະສົງການຄົ້ນຄວ້າ, ຄວາມສາມາດໃນການແຍກໄລໂຊໂຊມ ແລະ ເປີອົກຊີໂຊມ ຜ່ານການປั่นແຍກມີການນຳໃຊ້ໃນການວິນິດໄສທາງການແພດ, ການພັດທະນາຢາ, ແລະ ການແຊກແຊງດ້ານການປິ່ນປົວ. ໂດຍການເຂົ້າໃຈໜ້າທີ່ຂອງອະໄວຍະວະເຫຼົ່ານີ້ດີຂຶ້ນ, ນັກວິທະຍາສາດສາມາດຄົ້ນຫາຍຸດທະສາດການປິ່ນປົວແບບໃໝ່ທີ່ແນໃສ່ຄວາມຜິດປົກກະຕິຂອງໄລໂຊໂຊມ ຫຼື ເປີອົກຊີໂຊມ, ເຊັ່ນ: ພະຍາດການເກັບຮັກສາໄລໂຊໂຊມ ຫຼື ຄວາມຜິດປົກກະຕິຂອງຊີວະວິທະຍາເປີອົກຊີໂຊມ.

ສະຫຼຸບແລ້ວ, ການແຍກໄລໂຊໂຊມອອກຈາກເປີອົກຊີໂຊມໂດຍໃຊ້ເຕັກນິກການປั่นແຍກ, ເຊັ່ນ: ການປั่นແຍກແບບດິຟເຟີເຣນຊຽລເຟີເຣນຊຽລ ແລະ ການປั่นແຍກແບບຄວາມໜາແໜ້ນ, ແມ່ນວິທີການທີ່ສຳຄັນໃນການຄົ້ນຄວ້າຊີວະວິທະຍາຂອງຈຸລັງ. ເຕັກນິກເຫຼົ່ານີ້ຊ່ວຍໃຫ້ນັກວິທະຍາສາດສາມາດໄດ້ຮັບສ່ວນປະສົມທີ່ບໍລິສຸດຂອງໄລໂຊໂຊມ ແລະ ເປີອົກຊີໂຊມ, ຊ່ວຍໃນຄວາມເຂົ້າໃຈກ່ຽວກັບບົດບາດສ່ວນຕົວຂອງພວກມັນ, ເສັ້ນທາງການເຜົາຜານອາຫານ, ແລະ ການແຊກແຊງການປິ່ນປົວທີ່ມີທ່າແຮງສຳລັບພະຍາດທີ່ກ່ຽວຂ້ອງ.