Ahoana ny fomba hanasarahana ny lysosomes avy amin'ny peroxisomes amin'ny centrifugation

Fampidirana ny Lysosomes sy Peroxisomes

Organela sela roa misaraka ny lysôsôma sy ny péroxisôma, izay samy manana ny asany miavaka, izay mitana anjara toerana lehibe amin'ny metabolisma sy ny homeostasis sela. Organela mifamatotra amin'ny fonon-sela ny lysôsôma, feno anzima fandevonan-kanina tompon'andraikitra amin'ny fandravana ireo fako ao amin'ny sela, ireo poti-javatra vahiny, ary ireo mikraoba. Ny péroxisôma kosa dia mandray anjara amin'ny fihetsika metabolika isan-karazany, indrindra ireo mifandraika amin'ny detoxification sy ny metabolisman'ny lipida. Mba handinihana ireo organela ireo misaraka, ny fomba iray ampiasaina matetika dia ny centrifugation. Ato amin'ity lahatsoratra ity, dia hojerentsika ny fomba azo ampiasana ny centrifugation mba hanasarahana amim-pahombiazana ny lysôsôma amin'ny péroxisôma.

Fitsipika sy Teknika momba ny Centrifugation

Teknika mahery vaika ampiasaina hanasarahana ireo singa samihafa ao anaty fangaro tsy mitovy habe, hakitroky ary endrika ny "centrifugation". Miasa amin'ny fitsipiky ny sedimentation izy io, izay ipetrahan'ny poti-javatra mavesatra kokoa haingana kokoa eo ambany herin'ny "centrifugal force". Mba hanasarahana ny lysosomes amin'ny peroxisomes, dia azo ampiasaina ny teknika "centrifugation" samihafa, toy ny "differential centrifugation" sy ny "density gradient centrifugation".

Centrifugation Differential: Fanesorana Lysosomes sy Peroxisomes

Ny centrifugation differential dia misy andiana dingana centrifugation amin'ny hafainganam-pandeha sy faharetana samihafa mba hanasarahana ireo organelles mifototra amin'ny hakitroky ny sela. Toy izao ny fomba azo ampiasana azy mba hanesorana ireo lysosomes sy peroxisomes:

Dingana 1: Fampitoviana

Ny dingana voalohany dia ny mamaky moramora ireo sela ary mamoaka ny ao anatiny amin'ny alàlan'ny teknika homogenization. Azo tanterahina izany amin'ny alàlan'ny sonicating na amin'ny fampiasana homogenizer manokana. Ny fangaro vokarina dia antsoina hoe homogenate.

Dingana 2: Fampidirana amin'ny alalan'ny "Cenrifugation" amin'ny hafainganam-pandeha ambany

Avy eo dia ampiasaina amin'ny centrifugation miadana (manodidina ny 1.000-2.000 xg) mandritra ny fotoana fohy ny homogenate. Ity dingana ity dia manampy amin'ny fanasarahana ny poti-sela lehibe kokoa sy ny ampahany nokleary amin'ny organelles hafa ao amin'ny homogenate.

Dingana 3: Fampidirana amin'ny hafainganam-pandeha antonony

Ny ranoka azo avy amin'ny dingana centrifugation miadana dia iharan'ny centrifugation antonony hafainganam-pandeha (eo amin'ny 10.000 xg eo ho eo) mba handrotsahana ireo organelles mavesatra toy ny lysosomes sy peroxisomes. Io dingana io dia miteraka pellet misy ireo organelles ireo.

Dingana 4: Sasao ary averina averina

Sasana amin'ny vahaolana "buffered" sahaza azy ny pellet azo tamin'ny dingana teo aloha ary avy eo averina averina mihantona mba hahazoana ampahany lysosome sy peroxisome voadio.

Fanesorana ny fiovaovan'ny hakitroky amin'ny alalan'ny "density gradient centrifugation": Fanatsarana ny fisarahana

Teknika mandroso amin'ny centrifugation ny "density gradient centrifugation" izay ahafahana manadio sy manatsara bebe kokoa ny lysosomes sy peroxisomes. Amin'ity teknika ity, dia amboarina ny "density gradient" amin'ny alalan'ny vahaolana mamorona "gradient" toy ny sucrose na iodixanol. Toy izao ny fomba fampiharana azy:

Dingana 1: Fanomanana ny Gradient Density

Misy fitaovana fampifangaroana hakitroky, toy ny sucrose, izay omanina ao anaty fantsona centrifuge, miaraka amin'ny hakitroky miovaova hatrany ambony ka hatrany ambany na hatrany ambany ka hatrany ambony. Ny firafitry ny fitaovana fampifangaroana hakitroky sy ny hakitroky dia nofantenana tsara, mba hahazoana antoka fa maivana kokoa noho ny peroxisomes izy io fa matevina kokoa noho ny lysosomes.

Dingana 2: Fametrahana sosona ny santionany

Apetraka tsara eo ambonin'ny fitaovana misy ny gradient density ny ampahany lysosome sy peroxisome mihantona indray azo avy amin'ny centrifugation differential.

Dingana 3: Fanenjanana

Avy eo dia ampiasaina amin'ny centrifugation haingam-pandeha (ultracentrifugation) ny fantsona mba hanasarahana ny lysosome sy ny peroxisome mifototra amin'ny hakitroky ny mitsingevana. Mandritra ny centrifugation, dia mihetsika ao anatin'ilay fitaovana ireo organelles mandra-pahatongany any amin'ny faritra iray izay mitovy amin'ny hakitroky ny mitsingevana ny hakitroky ny fitaovana manodidina, ka mamorona tarika miavaka.

Famakafakana sy fampiharana fanampiny

Rehefa vita soa aman-tsara ny fisarahana dia azo hadihadiana bebe kokoa amin'ny alalan'ny teknika isan-karazany ireo ampahan'ny lysosome sy peroxisome azo mba hanombanana ny fahadiovan'izy ireo, ny habeny, ny firafiny ary ny toetrany miasa. Ny teknika toy ny mikroskopia elektrôna, ny immunocytochemistry, ary ny fanadihadiana ny asan'ny anzima dia afaka manome fahatakarana sarobidy momba ireo ampahan'ny singa mitokana, manamafy ny maha-izy azy sy ny fahadiovan'izy ireo.

Ankoatra ny tanjon'ny fikarohana, ny fahafahana manasaraka ny lysosomes sy ny peroxisomes amin'ny alàlan'ny centrifugation dia azo ampiharina amin'ny diagnostika ara-pitsaboana, ny fampivoarana fanafody, ary ny fitsaboana. Amin'ny alàlan'ny fahatakarana tsara kokoa ny asan'ireo organelles ireo, dia afaka mikaroka paikady fitsaboana vaovao mikendry ny aretina lysosomal na peroxisomal ny mpahay siansa, toy ny aretina fitahirizana lysosomal na ny aretina biogenesis peroxisome.

Ho famaranana, ny fanasarahana ny lysosomes amin'ny peroxisomes amin'ny alàlan'ny teknika centrifugation, toy ny differential centrifugation sy ny density gradient centrifugation, dia fomba fiasa tena ilaina amin'ny fikarohana momba ny biolojian'ny sela. Ireo teknika ireo dia ahafahan'ny mpahay siansa mahazo ampahany voadio amin'ny lysosomes sy peroxisomes, manampy amin'ny fahatakarana ny anjara asan'izy ireo tsirairay, ny lalan'ny metabolisma, ary ny fitsaboana mety ho azo atao amin'ny aretina mifandraika amin'izany.