လိုင်ဆိုဆုမ်းများကို ပါအောက်ဆီဆုမ်းများမှ မည်သို့ခွဲထုတ်ရမည်နည်း ဗဟိုခွာခြင်း

လိုင်ဆိုဆုမ်းနှင့် ပါရောက်ဆီဆုမ်းများ မိတ်ဆက်ခြင်း

လိုင်ဆိုဆုမ်းများနှင့် ပါအောက်ဆီဆုမ်းများသည် ဆဲလ်ဇီဝဖြစ်စဉ်နှင့် homeostasis တွင် အရေးပါသောအခန်းကဏ္ဍမှ ပါဝင်သည့် ထူးခြားသောလုပ်ဆောင်ချက်များရှိသည့် သီးခြားဆဲလ်အင်္ဂါအစိတ်အပိုင်းနှစ်ခုဖြစ်သည်။ လိုင်ဆိုဆုမ်းများသည် ဆဲလ်အညစ်အကြေးများ၊ ပြင်ပအမှုန်အမွှားများနှင့် ရောဂါပိုးများကို ချေဖျက်ပေးသည့် အစာခြေအင်ဇိုင်းများဖြင့် ပြည့်နှက်နေသော အမြှေးပါးနှင့်ချည်နှောင်ထားသော အင်္ဂါအစိတ်အပိုင်းများဖြစ်သည်။ အခြားတစ်ဖက်တွင်၊ ပါအောက်ဆီဆုမ်းများသည် အထူးသဖြင့် အဆိပ်ဖယ်ရှားခြင်းနှင့် lipid ဇီဝဖြစ်စဉ်နှင့် ဆက်စပ်သော ဇီဝဖြစ်စဉ်တုံ့ပြန်မှုအမျိုးမျိုးတွင် ပါဝင်ပတ်သက်သည်။ ဤအင်္ဂါအစိတ်အပိုင်းများကို သီးခြားလေ့လာရန်အတွက် အသုံးများသောနည်းလမ်းတစ်ခုမှာ centrifugation ဖြစ်သည်။ ဤဆောင်းပါးတွင်၊ လိုင်ဆိုဆုမ်းများကို ပါအောက်ဆီဆုမ်းများမှ အောင်မြင်စွာခွဲထုတ်ရန် centrifugation ကို မည်သို့အသုံးပြုနိုင်သည်ကို ကျွန်ုပ်တို့ လေ့လာပါမည်။

ဗဟိုခွာခြင်းဆိုင်ရာ အခြေခံမူများနှင့် နည်းစနစ်များ

ဗဟိုခွာရည်ထုတ်ခြင်းသည် ၎င်းတို့၏ အရွယ်အစား၊ သိပ်သည်းဆနှင့် ပုံသဏ္ဍာန်အပေါ် အခြေခံ၍ ကွဲပြားခြားနားသော ရောနှောမှု၏ မတူညီသော အစိတ်အပိုင်းများကို ၎င်းတို့၏ အရွယ်အစား၊ သိပ်သည်းဆနှင့် ပုံသဏ္ဍာန်အပေါ် အခြေခံ၍ ခွဲခြားရန် အသုံးပြုသည့် အစွမ်းထက်သော နည်းပညာတစ်ခုဖြစ်သည်။ ၎င်းသည် ဗဟိုခွာရည်ထုတ်အား၏ သြဇာလွှမ်းမိုးမှုအောက်တွင် ပိုလေးသော အမှုန်အမွှားများ ပိုမိုမြန်ဆန်စွာ အခြေချသည့် အနည်ထိုင်ခြင်း၏ မူများအပေါ်တွင် အလုပ်လုပ်သည်။ လိုင်ဆိုဆုမ်းများကို ပါအောက်ဆီဆုမ်းများမှ ခွဲထုတ်ရန်အတွက်၊ ကွဲပြားသော ဗဟိုခွာရည်ထုတ်ခြင်းနှင့် သိပ်သည်းဆ gradient ဗဟိုခွာရည်ထုတ်ခြင်းကဲ့သို့သော မတူညီသော ဗဟိုခွာရည်ထုတ်ခြင်း နည်းပညာများကို အသုံးပြုနိုင်ပါသည်။

ဒစ်ဖရန်ရှယ် စင်ထရီဖူဂရှင်း- လိုင်ဆိုဆုမ်းများနှင့် ပါအောက်ဆီဆုမ်းများကို ထုတ်ယူခြင်း

ဒစ်ဖ্যান ...

အဆင့် ၁: တစ်သားတည်းဖြစ်အောင်ပြုလုပ်ခြင်း

ပထမအဆင့်မှာ homogenization နည်းပညာကို အသုံးပြု၍ ဆဲလ်များကို ညင်သာစွာ ခွဲထုတ်ပြီး ၎င်းတို့၏ အရောအနှောများကို ထုတ်လွှတ်ရန်ဖြစ်သည်။ ၎င်းကို sonicating သို့မဟုတ် အထူးပြု homogenizer ကို အသုံးပြုခြင်းဖြင့် ပြုလုပ်နိုင်သည်။ ရရှိလာသော အရောအနှောကို homogenate ဟုခေါ်သည်။

အဆင့် ၂: အနိမ့်မြန်နှုန်း ဗဟိုခွာစက်ဖြင့် လည်ပတ်ခြင်း

ထို့နောက် homogenate ကို အမြန်နှုန်းနိမ့် centrifugation (1,000-2,000 xg ခန့်) ဖြင့် အချိန်တိုအတွင်း ပြုလုပ်သည်။ ဤအဆင့်သည် homogenate တွင်ရှိသော ကျန် organelles များမှ ပိုကြီးသော ဆဲလ်အပျက်အစီးများနှင့် nuclear fraction ကို ခွဲထုတ်ရန် ကူညီပေးသည်။

အဆင့် ၃: အလယ်အလတ်အမြန်နှုန်း ဗဟိုခွာခြင်း

အနိမ့်အမြန်နှုန်း centrifugation အဆင့်မှရရှိသော supernatant ကို lysosomes နှင့် peroxisomes ကဲ့သို့သော လေးလံသော organelles များထဲသို့ အလတ်စားအမြန်နှုန်း centrifugation (10,000 xg ခန့်) ပြုလုပ်သည်။ ဤအဆင့်သည် ဤ organelles များပါ၀င်သော pellet ကို ဖြစ်ပေါ်စေသည်။

အဆင့် ၄: ဆေးကြောပြီး ပြန်လည်ရောစပ်ပါ

ယခင်အဆင့်တွင်ရရှိသော pellet ကို သင့်လျော်သော buffered solution ဖြင့်ဆေးကြောပြီးနောက် သန့်စင်ထားသော lysosome နှင့် peroxisome fraction ရရှိရန် ပြန်လည်ရောစပ်သည်။

သိပ်သည်းဆ ချိန်ညှိခြင်း- ခွဲထုတ်ခြင်းကို သန့်စင်ခြင်း

သိပ်သည်းဆ gradient centrifugation သည် lysosomes နှင့် peroxisomes များကို ပိုမိုသန့်စင်ခြင်းနှင့် ပိုမိုကောင်းမွန်စေခြင်းတို့ကို ပြုလုပ်နိုင်စေသည့် အဆင့်မြင့် centrifugation နည်းပညာတစ်ခုဖြစ်သည်။ ဤနည်းပညာတွင်၊ sucrose သို့မဟုတ် iodixanol ကဲ့သို့သော gradient-forming solution ကို အသုံးပြု၍ သိပ်သည်းဆ gradient ကို ဖွဲ့စည်းသည်။ ၎င်းကို မည်သို့အသုံးချနိုင်သည်မှာ အောက်ပါအတိုင်းဖြစ်သည်။

အဆင့် ၁: သိပ်သည်းဆ ပြောင်းလဲမှု ပြင်ဆင်ခြင်း

သကြားကဲ့သို့သော သိပ်သည်းဆ gradient အလတ်စားကို centrifuge ပြွန်တစ်ခုတွင် အပေါ်မှအောက်ခြေ သို့မဟုတ် အောက်မှအပေါ်သို့ သိပ်သည်းဆအမျိုးမျိုးဖြင့် ပြင်ဆင်ထားသည်။ gradient အလတ်စား၏ ဖွဲ့စည်းမှုနှင့် သိပ်သည်းဆကို ဂရုတစိုက်ရွေးချယ်ထားပြီး ၎င်းသည် peroxisomes ထက်ပေါ့ပါးသော်လည်း lysosomes ထက်ပိုမိုသိပ်သည်းဆရှိကြောင်း သေချာစေသည်။

အဆင့် ၂: နမူနာကို အလွှာလိုက်ခြင်း

differential centrifugation မှရရှိသော resuspended lysosome နှင့် peroxisome အပိုင်းအစကို density gradient medium ၏ထိပ်တွင် ဂရုတစိုက်အလွှာလိုက်ထားသည်။

အဆင့် ၃: ဗဟိုခွာခြင်း

ထို့နောက် ပြွန်ကို ၎င်းတို့၏ ပေါလောမျောနေသော သိပ်သည်းဆများအပေါ် အခြေခံ၍ lysosomes နှင့် peroxisomes များကို ခွဲခြားရန်အတွက် မြန်နှုန်းမြင့် centrifugation (ultracentrifugation) ဖြင့် ခွဲထုတ်သည်။ centrifugation အတွင်း၊ organelles များသည် ပတ်ဝန်းကျင်ရှိ medium ၏ သိပ်သည်းဆနှင့် ကိုက်ညီသော ဧရိယာသို့ ရောက်ရှိသည်အထိ medium မှတစ်ဆင့် ရွေ့လျားပြီး ကွဲပြားသော band များကို ဖွဲ့စည်းသည်။

ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းနှင့် နောက်ထပ်အသုံးချမှုများ

အောင်မြင်စွာ ခွဲထုတ်ပြီးနောက်၊ ရရှိလာသော lysosome နှင့် peroxisome အပိုင်းအစများကို ၎င်းတို့၏ သန့်ရှင်းစင်ကြယ်မှု၊ အရွယ်အစား၊ ပါဝင်မှုနှင့် လုပ်ဆောင်ချက်ဆိုင်ရာ ဂုဏ်သတ္တိများကို အကဲဖြတ်ရန် နည်းစနစ်အမျိုးမျိုးကို အသုံးပြု၍ နောက်ထပ် ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာနိုင်ပါသည်။ အီလက်ထရွန် အဏုကြည့်မှန်ပြောင်း၊ ကိုယ်ခံအား ဆိုက်တိုဓာတုဗေဒ နှင့် အင်ဇိုင်း လှုပ်ရှားမှု စမ်းသပ်မှုများကဲ့သို့သော နည်းစနစ်များသည် သီးခြားခွဲထုတ်ထားသော အပိုင်းအစများအကြောင်း အဖိုးတန် ထိုးထွင်းသိမြင်မှုများကို ပေးစွမ်းနိုင်ပြီး ၎င်းတို့၏ ဝိသေသလက္ခဏာနှင့် သန့်ရှင်းစင်ကြယ်မှုကို အတည်ပြုနိုင်ပါသည်။

သုတေသနရည်ရွယ်ချက်များအပြင်၊ ဗဟိုခွာခြင်းမှတစ်ဆင့် lysosomes နှင့် peroxisomes များကို ခွဲထုတ်နိုင်စွမ်းသည် ဆေးဘက်ဆိုင်ရာရောဂါရှာဖွေရေး၊ ဆေးဝါးဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်ရေးနှင့် ကုထုံးဆိုင်ရာကြားဝင်ဆောင်ရွက်မှုများတွင် အသုံးချမှုများရှိသည်။ ဤအင်္ဂါအစိတ်အပိုင်းများ၏ လုပ်ဆောင်ချက်များကို ပိုမိုကောင်းမွန်စွာနားလည်ခြင်းဖြင့် သိပ္ပံပညာရှင်များသည် lysosomal သိုလှောင်မှုရောဂါများ သို့မဟုတ် peroxisome biogenesis ရောဂါများကဲ့သို့သော lysosomal သို့မဟုတ် peroxisomal ရောဂါများကို ပစ်မှတ်ထားသည့် ကုထုံးနည်းဗျူဟာအသစ်များကို စူးစမ်းလေ့လာနိုင်သည်။

အဆုံးသတ်အနေနဲ့၊ differential centrifugation နဲ့ density gradient centrifugation လိုမျိုး centrifugation နည်းပညာတွေကို အသုံးပြုပြီး lysosomes တွေကို peroxisomes တွေကနေ ခွဲထုတ်ခြင်းဟာ ဆဲလ်ဇီဝဗေဒ သုတေသနမှာ မရှိမဖြစ် ချဉ်းကပ်မှုတစ်ခု ဖြစ်ပါတယ်။ ဒီနည်းပညာတွေက သိပ္ပံပညာရှင်တွေကို lysosomes နဲ့ peroxisomes တွေရဲ့ သန့်စင်ထားတဲ့ အပိုင်းအစတွေကို ရရှိနိုင်စေပြီး သူတို့ရဲ့ တစ်ဦးချင်း အခန်းကဏ္ဍတွေ၊ ဇီဝဖြစ်စဉ်လမ်းကြောင်းတွေနဲ့ ဆက်စပ်ရောဂါတွေအတွက် အလားအလာရှိတဲ့ ကုထုံးဆိုင်ရာ ကြားဝင်ဆောင်ရွက်မှုတွေကို နားလည်ဖို့ ကူညီပေးပါတယ်။