Báwo ni a ṣe lè ya àwọn lysosomes sọ́tọ̀ láti ṣe peroxisomes centrifugation

Ifihan si awọn Lysosomes ati awọn Peroxisomes

Àwọn Lysosome àti peroxisome jẹ́ àwọn organelles sẹ́ẹ̀lì méjì ọ̀tọ̀ọ̀tọ̀ pẹ̀lú iṣẹ́ pàtàkì tí wọ́n ń kópa nínú ìṣiṣẹ́ sẹ́ẹ̀lì àti homeostasis. Àwọn Lysosome jẹ́ àwọn organelles tí a fi membrane dè tí ó kún fún àwọn enzymes oúnjẹ tí ó ń fa ìfọ́ àwọn ohun èlò ìdọ̀tí sẹ́ẹ̀lì, àwọn èròjà àjèjì, àti àwọn àkóràn. Ní ọwọ́ kejì ẹ̀wẹ̀, àwọn Peroxisomes ní ipa nínú onírúurú ìṣesí ìṣiṣẹ́, pàápàá jùlọ àwọn tí ó níí ṣe pẹ̀lú ìfọ́mọ́ àti ìṣiṣẹ́ lipid. Láti kẹ́kọ̀ọ́ àwọn organelles wọ̀nyí lọ́tọ̀ọ̀tọ̀, ọ̀nà kan tí a sábà máa ń lò ni centrifugation. Nínú àpilẹ̀kọ yìí, a ó ṣe àwárí bí a ṣe lè lo centrifugation láti ya àwọn lysosomes kúrò nínú peroxisomes ní àṣeyọrí.

Àwọn Ìlànà àti Ìlànà Ìfàsẹ́yìn Centrifugation

Ìwọ̀n ìfàsẹ́yìn jẹ́ ọ̀nà alágbára kan tí a ń lò láti ya àwọn ẹ̀yà ara onírúurú nínú àdàpọ̀ onírúurú sọ́tọ̀ gẹ́gẹ́ bí ìwọ̀n wọn, ìwọ̀n wọn, àti ìrísí wọn. Ó ń ṣiṣẹ́ lórí ìlànà ìfàsẹ́yìn, níbi tí àwọn èròjà tí ó wúwo jù ti ń rọ̀ sílẹ̀ kíákíá lábẹ́ ipa agbára ìfàsẹ́yìn. Láti ya àwọn lysosomes sọ́tọ̀ kúrò nínú àwọn peroxisomes, a lè lo àwọn ọ̀nà ìfàsẹ́yìn onírúurú, bíi ìfàsẹ́yìn ìfàsẹ́yìn ìyípadà àti ìfàsẹ́yìn ìfàsẹ́yìn ìfàsẹ́yìn ìfàsẹ́yìn.

Ìyàtọ̀ sí Ìpínkiri: Yíyọ àwọn Lysosome àti Peroxisomes kúrò

Ìyàtọ̀ centrifugation ní àwọn ìgbésẹ̀ centrifugation ní àwọn iyàrá àti àkókò tó yàtọ̀ síra láti ya àwọn organelles sọ́tọ̀ gẹ́gẹ́ bí ìwọ̀n wọn. Èyí ni bí a ṣe lè lò ó láti yọ àwọn lysosomes àti peroxisomes jáde:

Igbesẹ 1: Isọdọkan

Igbesẹ akọkọ ni lati fọ awọn sẹẹli naa ni rọra ki o si tu akoonu wọn silẹ nipa lilo ilana homogenization. Eyi le ṣee ṣe nipa sisọ tabi lilo homogenizer pataki kan. A pe adalu ti o jade ni homogenate.

Igbesẹ 2: Isẹnti Iyara Kekere

Lẹ́yìn náà, a máa fi centrifugation onípele kékeré (tó tó 1,000-2,000 xg) lé e lọ́wọ́ fún ìgbà díẹ̀. Ìgbésẹ̀ yìí ń ran lọ́wọ́ láti ya àwọn ìdọ̀tí sẹ́ẹ̀lì tó tóbi jù àti ìpín nuclear kúrò lára ​​àwọn organelles tó kù tó wà nínú homogenate náà.

Igbesẹ 3: Centrifugation Alabọde-Iyara

Agbára ìṣàn omi tí a rí láti inú ìgbésẹ̀ ìfàsẹ́yìn oníyára kékeré ni a fi centrifugation oníyára àárín (tó tó 10,000 xg) sí àwọn organelles tó wúwo bíi lysosomes àti peroxisomes. Ìgbésẹ̀ yìí yóò yọrí sí pellet kan tí ó ní àwọn organelles wọ̀nyí.

Igbesẹ 4: Fọ ati Tun-fi-pada sipo

A fi omi tó yẹ tí a fi buffered fọ pellet náà, lẹ́yìn náà a tún fi pa á mọ́ láti gba ìpín lysosome àti peroxisome tí a ti wẹ̀ mọ́.

Ìwọ̀n Ìwọ̀n Ìwọ̀n Ìwọ̀n Ìwọ̀n: Ṣíṣe àtúnṣe Ìyàsọ́tọ̀ náà

Ìwọ̀n ìyípadà ìpele density jẹ́ ọ̀nà ìtẹ̀síwájú centrifugation tí ó gba ààyè fún ìwẹ̀nùmọ́ àti ìtúnṣe síwájú síi ti àwọn lysosomes àti peroxisomes. Nínú ọ̀nà yìí, a ń ṣe ìyípadà ìpele density nípa lílo omi ìyípadà ìpele bíi sucrose tàbí iodixanol. Bá a ṣe lè lò ó nìyí:

Igbesẹ 1: Igbaradi Gradient Density

A máa ń pèsè ìwọ̀n ìpele ìpele, bíi sucrose, nínú páìpù centrifuge, pẹ̀lú onírúurú ìwọ̀n láti òkè dé ìsàlẹ̀ tàbí ìsàlẹ̀ dé òkè. A fi ìṣọ́ra yan àkójọpọ̀ àti ìwọ̀n ìpele ìpele ìpele náà, èyí tí ó ń rí i dájú pé ó fẹ́rẹ̀ ju peroxisomes lọ ṣùgbọ́n ó nípọn ju lysosomes lọ.

Igbesẹ 2: Ṣíṣe Àwòrán Líle

A fi ìdàpọ̀ lysosome àti peroxisome tí a tún dá dúró tí a rí láti inú differential centrifugation ṣe àkójọpọ̀ rẹ̀ dáadáa lórí ẹ̀rọ ìpele density gradient.

Igbesẹ 3: Ṣíṣe centrifugation

Lẹ́yìn náà, a óò fi centrifugation oníyára gíga (ultracentrifugation) sí ọ̀tọ̀ọ̀tọ̀ lysosomes àti peroxisomes ní ìbámu pẹ̀lú ìwọ̀n ìfúnpọ̀ wọn. Nígbà tí a bá ń centrifugation, àwọn organelles náà máa ń rìn gba àárín títí wọ́n fi dé agbègbè kan níbi tí ìwọ̀n ìfúnpọ̀ wọn bá ìwọ̀n ìfúnpọ̀ wọn mu, tí wọ́n sì máa ń ṣe àwọn ìpele tí ó yàtọ̀ síra.

Ìṣàyẹ̀wò àti Àwọn Ohun Èlò Síwájú

Lẹ́yìn ìyàsọ́tọ̀ tó yọrí sí rere, a lè tún ṣàyẹ̀wò àwọn ìpín lysosome àti peroxisome tí a rí nípa lílo onírúurú ọ̀nà láti ṣe àyẹ̀wò ìwà mímọ́ wọn, ìwọ̀n wọn, ìṣẹ̀dá wọn, àti àwọn ànímọ́ iṣẹ́ wọn. Àwọn ọ̀nà bíi electron microscopy, immunocytochemistry, àti àwọn àyẹ̀wò ìṣiṣẹ́ enzyme lè fúnni ní òye tó ṣeyebíye nípa àwọn ìpín tí a yà sọ́tọ̀, tí yóò sì jẹ́rìí sí ìdámọ̀ àti ìmọ́tótó wọn.

Yàtọ̀ sí àwọn ète ìwádìí, agbára láti ya àwọn lysosomes àti peroxisomes sọ́tọ̀ nípasẹ̀ centrifugation ní àwọn lílò nínú àyẹ̀wò ìṣègùn, ìdàgbàsókè oògùn, àti àwọn ìtọ́jú ìlera. Nípa lílóye iṣẹ́ àwọn organelles wọ̀nyí dáadáa, àwọn onímọ̀ sáyẹ́ǹsì lè ṣe àwárí àwọn ọgbọ́n ìtọ́jú tuntun tí ó ń dojúkọ àwọn àrùn lysosomal tàbí peroxisomal, bí àwọn àrùn ìpamọ́ lysosomal tàbí àwọn àrùn biogenesis peroxisome.

Ní ìparí, ìyàsọ́tọ̀ àwọn lysosomes kúrò lára ​​àwọn peroxisomes nípa lílo àwọn ọ̀nà centrifugation, bíi differential centrifugation àti density gradient centrifugation, jẹ́ ọ̀nà pàtàkì nínú ìwádìí nípa ẹ̀dá sẹ́ẹ̀lì. Àwọn ọ̀nà wọ̀nyí mú kí àwọn onímọ̀ sáyẹ́ǹsì lè gba àwọn ìpín tí a ti sọ di mímọ́ ti àwọn lysosomes àti peroxisomes, èyí tí ó ń ran wọ́n lọ́wọ́ láti lóye ipa wọn, àwọn ipa ọ̀nà ìṣiṣẹ́ ara, àti àwọn ìtọ́jú tí ó ṣeé ṣe fún àwọn àrùn tí ó jọra.