சென்ட்ரிஃபியூஜ் செப்பரேட்டர் மற்றும் மருந்து இயந்திரங்களின் தொழில்முறை உற்பத்தி நிறுவனம் - ஸோன்லிங்க்
பெராக்ஸிசோம்களிலிருந்து லைசோசோம்களைப் பிரிப்பது எப்படி - மையவிலக்கு
லைசோசோம்கள் மற்றும் பெராக்ஸிசோம்கள் பற்றிய அறிமுகம்
லைசோசோம்கள் மற்றும் பெராக்ஸிசோம்கள் என்பவை, செல் வளர்சிதை மாற்றம் மற்றும் சமநிலையில் முக்கியப் பங்கு வகிக்கும், தனித்துவமான செயல்பாடுகளைக் கொண்ட இரண்டு தனித்தனி செல் நுண்ணுறுப்புகள் ஆகும். லைசோசோம்கள் என்பவை, செல் கழிவுப் பொருட்கள், அந்நியத் துகள்கள் மற்றும் நோய்க்கிருமிகளை உடைக்கும் செரிமான நொதிகளால் நிரம்பிய, சவ்வால் சூழப்பட்ட நுண்ணுறுப்புகள் ஆகும். மறுபுறம், பெராக்ஸிசோம்கள் பல்வேறு வளர்சிதை மாற்ற வினைகளில், குறிப்பாக நச்சு நீக்கம் மற்றும் கொழுப்பு வளர்சிதை மாற்றம் தொடர்பான வினைகளில் ஈடுபடுகின்றன. இந்த நுண்ணுறுப்புகளைத் தனித்தனியாக ஆய்வு செய்ய, பொதுவாகப் பயன்படுத்தப்படும் ஒரு முறை மையவிலக்கு முறை ஆகும். இந்தக் கட்டுரையில், பெராக்ஸிசோம்களிலிருந்து லைசோசோம்களை வெற்றிகரமாகப் பிரித்தெடுக்க மையவிலக்கு முறையை எவ்வாறு பயன்படுத்தலாம் என்பதை ஆராய்வோம்.
மையவிலக்கு கோட்பாடுகள் மற்றும் நுட்பங்கள்
மையவிலக்கு முறை என்பது ஒரு பல்லினக் கலவையின் வெவ்வேறு கூறுகளை அவற்றின் அளவு, அடர்த்தி மற்றும் வடிவத்தின் அடிப்படையில் பிரிப்பதற்குப் பயன்படுத்தப்படும் ஒரு சக்திவாய்ந்த நுட்பமாகும். இது படிதல் கொள்கைகளின் அடிப்படையில் செயல்படுகிறது, இதில் மையவிலக்கு விசையின் தாக்கத்தால் கனமான துகள்கள் வேகமாக அடியில் தங்குகின்றன. பெராக்ஸிசோம்களிலிருந்து லைசோசோம்களைப் பிரிப்பதற்கு, வேறுபாட்டு மையவிலக்கு முறை மற்றும் அடர்த்திச் சரிவு மையவிலக்கு முறை போன்ற பல்வேறு மையவிலக்கு நுட்பங்களைப் பயன்படுத்தலாம்.
வேறுபாட்டு மையவிலக்கம்: லைசோசோம்கள் மற்றும் பெராக்ஸிசோம்களைப் பிரித்தெடுத்தல்
வேறுபாட்டு மையவிலக்கம் என்பது, நுண்ணுறுப்புகளை அவற்றின் அடர்த்தியின் அடிப்படையில் பிரிப்பதற்காக, வெவ்வேறு வேகங்களிலும் கால அளவுகளிலும் செய்யப்படும் தொடர்ச்சியான மையவிலக்கப் படிகளை உள்ளடக்கியதாகும். லைசோசோம்கள் மற்றும் பெராக்ஸிசோம்களைப் பிரித்தெடுக்க இதனை எவ்வாறு பயன்படுத்தலாம் என்பது இங்கே கொடுக்கப்பட்டுள்ளது:
படி 1: ஒருபடித்தாக்கல்
ஒருபடித்தாக்கல் நுட்பத்தைப் பயன்படுத்தி, செல்களை மெதுவாக உடைத்து அவற்றின் உள்ளடக்கங்களை வெளியேற்றுவதே முதல் படியாகும். இதை மீயொலி அலைகளைப் பயன்படுத்துவதன் மூலமோ அல்லது ஒரு சிறப்பு ஒருபடித்தாக்கியைப் பயன்படுத்துவதன் மூலமோ அடையலாம். இதன் விளைவாகக் கிடைக்கும் கலவை, ஒருபடித்தாக்கப்பட்ட கலவை (homogenate) என்று குறிப்பிடப்படுகிறது.
படி 2: குறைந்த வேக மையவிலக்கு
பின்னர், அந்த ஒருபடித்தான கலவையானது குறுகிய காலத்திற்கு குறைந்த வேக மையவிலக்கலுக்கு (சுமார் 1,000-2,000 xg) உட்படுத்தப்படுகிறது. இந்த படிநிலையானது, ஒருபடித்தான கலவையில் உள்ள மற்ற நுண்ணுறுப்புகளிலிருந்து பெரிய செல் சிதைவுகளையும் உட்கருப் பகுதியையும் பிரித்தெடுக்க உதவுகிறது.
படி 3: நடுத்தர வேக மையவிலக்கு
குறைந்த வேக மையவிலக்குச் சுழற்சிப் படியிலிருந்து பெறப்பட்ட மேல்தேங்கிய திரவமானது, லைசோசோம்கள் மற்றும் பெராக்ஸிசோம்கள் போன்ற கனமான நுண்ணுறுப்புகளை வீழ்படிவாக்குவதற்காக, நடுத்தர வேக மையவிலக்குச் சுழற்சிக்கு (சுமார் 10,000 xg) உட்படுத்தப்படுகிறது. இந்தப் படியின் விளைவாக, இந்த நுண்ணுறுப்புகளைக் கொண்ட ஒரு வீழ்படிவு கிடைக்கிறது.
படி 4: கழுவி மீண்டும் கலக்கவும்
முந்தைய படியில் பெறப்பட்ட திண்மமானது, பொருத்தமான தாங்கல் கரைசலால் கழுவப்பட்டு, பின்னர் சுத்திகரிக்கப்பட்ட லைசோசோம் மற்றும் பெராக்ஸிசோம் பகுதியைப் பெறுவதற்காக மீண்டும் கரைக்கப்படுகிறது.
அடர்த்தி சாய்வு மையவிலக்கம்: பிரித்தலைச் செம்மைப்படுத்துதல்
அடர்த்தி சாய்வு மையவிலக்கம் என்பது லைசோசோம்கள் மற்றும் பெராக்ஸிசோம்களை மேலும் தூய்மைப்படுத்தவும் சுத்திகரிக்கவும் உதவும் ஒரு மேம்பட்ட மையவிலக்க நுட்பமாகும். இந்த நுட்பத்தில், சுக்ரோஸ் அல்லது அயோடிக்ஸானால் போன்ற சாய்வு உருவாக்கும் கரைசலைப் பயன்படுத்தி ஒரு அடர்த்தி சாய்வு உருவாக்கப்படுகிறது. இதை எவ்வாறு பயன்படுத்தலாம் என்பது இங்கே கொடுக்கப்பட்டுள்ளது:
படி 1: அடர்த்தி சாய்வைத் தயாரித்தல்
சுக்ரோஸ் போன்ற ஒரு அடர்த்தி சரிவு ஊடகம், ஒரு மையவிலக்குக் குழாயில், மேலிருந்து கீழாகவோ அல்லது கீழிருந்து மேலாகவோ மாறுபடும் அடர்த்திகளுடன் தயாரிக்கப்படுகிறது. இந்த சரிவு ஊடகத்தின் கலவையும் அடர்த்தியும் கவனமாகத் தேர்ந்தெடுக்கப்படுகின்றன; இதன்மூலம் அது பெராக்ஸிசோம்களை விட இலேசானதாகவும், லைசோசோம்களை விட அடர்த்தியானதாகவும் இருப்பது உறுதிசெய்யப்படுகிறது.
படி 2: மாதிரியை அடுக்கடுக்காக அமைத்தல்
வேறுபட்ட மையவிலக்கத்தின் மூலம் பெறப்பட்ட, மீண்டும் கரைக்கப்பட்ட லைசோசோம் மற்றும் பெராக்ஸிசோம் பகுதி, அடர்த்தி சாய்வு ஊடகத்தின் மீது கவனமாக அடுக்கப்படுகிறது.
படி 3: மையவிலக்கு
பின்னர், லைசோசோம்கள் மற்றும் பெராக்ஸிசோம்களை அவற்றின் மிதப்பு அடர்த்திகளின் அடிப்படையில் பிரிப்பதற்காக, அந்தக் குழாய் அதிவேக மையவிலக்கலுக்கு (அல்ட்ராசென்ட்ரிஃபியூகேஷன்) உட்படுத்தப்படுகிறது. மையவிலக்கலின் போது, அந்த நுண்ணுறுப்புகள், அவற்றின் மிதப்பு அடர்த்தி சுற்றியுள்ள ஊடகத்தின் அடர்த்தியுடன் பொருந்தும் ஒரு பகுதியை அடையும் வரை ஊடகத்தின் வழியே நகர்ந்து, தனித்துவமான பட்டைகளை உருவாக்குகின்றன.
பகுப்பாய்வு மற்றும் மேலதிக பயன்பாடுகள்
வெற்றிகரமாகப் பிரித்தெடுத்த பிறகு, பெறப்பட்ட லைசோசோம் மற்றும் பெராக்ஸிசோம் கூறுகளின் தூய்மை, அளவு, கலவை மற்றும் செயல்பாட்டுப் பண்புகளை மதிப்பிடுவதற்கு, அவற்றை பல்வேறு நுட்பங்களைப் பயன்படுத்தி மேலும் பகுப்பாய்வு செய்யலாம். எலக்ட்ரான் நுண்ணோக்கி, இம்யூனோசைட்டோகெமிஸ்ட்ரி மற்றும் நொதி செயல்பாட்டுச் சோதனைகள் போன்ற நுட்பங்கள், பிரித்தெடுக்கப்பட்ட கூறுகளின் அடையாளம் மற்றும் தூய்மையை உறுதிசெய்து, அவற்றைப் பற்றிய மதிப்புமிக்க நுண்ணறிவுகளை வழங்க முடியும்.
ஆராய்ச்சி நோக்கங்களைத் தாண்டி, மையவிலக்கு முறை மூலம் லைசோசோம்களையும் பெராக்ஸிசோம்களையும் பிரித்தெடுக்கும் திறனானது, மருத்துவ நோயறிதல், மருந்து உருவாக்கம் மற்றும் சிகிச்சை தலையீடுகள் ஆகியவற்றில் பயன்பாடுகளைக் கொண்டுள்ளது. இந்த நுண்ணுறுப்புகளின் செயல்பாடுகளை நன்கு புரிந்துகொள்வதன் மூலம், விஞ்ஞானிகள் லைசோசோமால் சேமிப்பு நோய்கள் அல்லது பெராக்ஸிசோம் உயிரியக்கவியல் கோளாறுகள் போன்ற லைசோசோமால் அல்லது பெராக்ஸிசோமால் கோளாறுகளைக் குறிவைத்து புதிய சிகிச்சை உத்திகளை ஆராய முடியும்.
முடிவாக, வேறுபாட்டு மையவிலக்கம் மற்றும் அடர்த்திச் சரிவு மையவிலக்கம் போன்ற மையவிலக்க நுட்பங்களைப் பயன்படுத்தி பெராக்ஸிசோம்களிலிருந்து லைசோசோம்களைப் பிரிப்பது, செல் உயிரியல் ஆராய்ச்சியில் ஒரு இன்றியமையாத அணுகுமுறையாகும். இந்த நுட்பங்கள், லைசோசோம்கள் மற்றும் பெராக்ஸிசோம்களின் தூய்மையாக்கப்பட்ட பகுதிகளைப் பெற விஞ்ஞானிகளுக்கு உதவுகின்றன; மேலும், அவற்றின் தனிப்பட்ட பங்குகள், வளர்சிதை மாற்றப் பாதைகள் மற்றும் தொடர்புடைய நோய்களுக்கான சாத்தியமான சிகிச்சை முறைகளைப் புரிந்துகொள்ளவும் துணைபுரிகின்றன.
.