Xloroplast va mitoxondriyani santrifugatsiya orqali qanday ajratish mumkin

Santrifüjlash: Xloroplast va Mitoxondriyani ajratishning kuchli usuli

Kirish:

Santrifüjlash molekulyar biologiya va biokimyoda keng qo'llaniladigan usul bo'lib, u turli hujayra komponentlarini ularning hajmi, shakli va zichligiga qarab ajratish imkonini beradi. Ushbu maqolada energiya ishlab chiqarish va boshqa muhim hujayra jarayonlarida ishtirok etadigan eukaryotik hujayralarda topilgan ikkita muhim organellalar - xloroplastlarni va mitoxondriyalarni ajratish uchun santrifüjlashning qo'llanilishini chuqur o'rganadi.

Xloroplastlar va mitoxondriyalarning hujayra jarayonlaridagi roli

O'simlik hujayralarida mavjud bo'lgan xloroplastlar fotosintez uchun javobgardir, bu jarayon yorug'lik energiyasini glyukoza shaklida saqlanadigan kimyoviy energiyaga aylantiradi. Bu muhim jarayon kislorod ishlab chiqarishni osonlashtiradi va Yer yuzida hayotning saqlanishi uchun juda muhimdir. O'simlik va hayvon hujayralarida uchraydigan mitoxondriyalar odatda hujayraning energiya manbai deb ataladi. Ular hujayra nafas olishi uchun javobgardir, glyukozani adenozin trifosfat (ATF) shaklida hujayra uchun foydali energiyaga aylantiradi.

Xloroplastlar va mitoxondriyalarni ajratish zarurati

Xloroplastlar va mitoxondriyalarning individual funktsiyalari va xususiyatlarini tushunish hujayra jarayonlari haqida tushunchaga ega bo'lish va turli kasalliklarni davolashning potentsial usullarini ishlab chiqishni maqsad qilgan tadqiqotchilar uchun juda muhimdir. Ushbu organellalarni hujayra tarkibiy qismlarining murakkab aralashmasidan ajratish keyingi tahlil va tajribalar uchun sof namunalarni olish uchun juda muhimdir. Bu ajratish santrifugatsiya orqali mumkin.

Santrifüj asoslari

Santrifüjlash namunadagi komponentlarni ajratish uchun markazdan qochma kuchdan foydalanishni o'z ichiga oladi. Namuna yuqori tezlikda aylanadigan rotorli mashina bo'lgan santrifüjga joylashtiriladi. Aylanish paytida markazdan qochma kuch zichroq komponentlarning pastki qismida cho'kib, granula hosil qiladi, zichroq komponentlar esa supernatantda qoladi. Santrifüjlash tezligi va davomiyligi, shuningdek, santrifüj naychalarini tanlash aniq qo'llanilish joyi va namuna tarkibiga qarab o'zgaradi.

Organelle ajratish uchun differentsial santrifüjlash

Organellalarni ajratish uchun eng ko'p qo'llaniladigan santrifüjlash usuli differentsial santrifüjlashdir. Ushbu usul namunani ortib boruvchi tezlik va davomiylikda bir qator differentsial santrifüjlashlarga duchor qilish orqali uni fraktsiyalash tamoyiliga asoslangan. Santrifüjlash parametrlarini sozlash orqali tadqiqotchilar xloroplastlarni va mitoxondriyalarni boshqa hujayra komponentlaridan samarali ajratishlari mumkin.

Xloroplastlar va mitoxondriyalarni ajratish bo'yicha bosqichma-bosqich qo'llanma

1-qadam: Gomogenizatsiya

Differentsial santrifugalashning birinchi bosqichi namunani gomogenizatsiya qilishdir. Bu jarayon hujayralarni sekin ochish va ularning tarkibini chiqarishni o'z ichiga oladi, bu esa organellalarga kirish imkonini beradi. Hujayralarni parchalash uchun mexanik parchalanish va suyuq azot bilan ishlov berish kabi bir nechta usullardan foydalanish mumkin.

2-bosqich: Differentsial santrifugatsiya

Gomogenizatsiyadan so'ng, namuna bir qator differentsial santrifugalarga duchor bo'ladi. Dastlabki past tezlikdagi santrifugalash (1000-2000 xg) katta hujayra qoldiqlarini va sinmagan hujayralarni olib tashlaydi, natijada xom mitoxondriya va xloroplast fraksiyasini qoldiradi. Keyin bu fraksiya yuqori tezlikdagi santrifugaga (10,000-15,000 xg) duchor bo'ladi, natijada xloroplastlarning mitoxondriyalardan ajralishi sodir bo'ladi.

3-qadam: Poklikni oshirish

Olingan xloroplast va mitoxondriya fraktsiyalarini yanada tozalash uchun qo'shimcha santrifüj bosqichlari bajarilishi mumkin. Bu har bir santrifüjdan keyin olingan granulani mos buferda qayta suspenziyalashni va jarayonni yuqori tezlik va davomiylik bilan takrorlashni o'z ichiga oladi. Ushbu qo'shimcha santrifüjlar qolgan ifloslantiruvchi moddalarni yo'q qilishga va yakuniy organella fraktsiyalarining tozaligini oshirishga yordam beradi.

Xulosa:

Santrifüjlash hujayra biologiyasi sohasida inqilob qilgan va hujayra komponentlarini ajratish uchun ajralmas vositaga aylangan ko'p qirrali usuldir. Differentsial santrifüjlashdan foydalanish orqali tadqiqotchilar xloroplastlarni va mitoxondriyalarni muvaffaqiyatli ajratib olishlari mumkin, bu esa keyingi tahlil va tajribalar uchun qimmatli tozalangan namunalarni taqdim etadi. Ushbu organellalarni ajratib olish qobiliyati ularning o'ziga xos funktsiyalari va mexanizmlarini o'rganish uchun eshiklarni ochadi, hujayra jarayonlarini yaxshiroq tushunishga hissa qo'shadi va turli ilmiy fanlardagi yutuqlarni rag'batlantiradi.