Ki ni iyara centrifuge lati ya awọn ribosome ọfẹ kuro
Iyara Centrifuge lati Ya Awọn Ribosomes Ọfẹ: Ọna Pataki fun Iwadi Imọ-jinlẹ Molecular
Ifihan:
Àwọn ribosomes ọ̀fẹ́ kó ipa pàtàkì nínú ìṣẹ̀dá amuaradagba, àti yíyà wọ́n sọ́tọ̀ kúrò lára àwọn èròjà sẹ́ẹ̀lì mìíràn jẹ́ iṣẹ́ pàtàkì nínú ìwádìí nípa ẹ̀dá alààyè. Àpilẹ̀kọ yìí ṣàlàyé pàtàkì iyara centrifuge nínú yíyà àwọn ribosomes ọ̀fẹ́ sọ́tọ̀ ó sì tẹnu mọ́ onírúurú ìlànà àti àwọn ohun tí a gbé yẹ̀ wò fún ìlànà yìí.
I. Lílóye Àwọn Ribosome Ọ̀fẹ́:
Láti lóye ìjẹ́pàtàkì iyàrá centrifuge nínú yíya àwọn ribosomes ọ̀fẹ́ sọ́tọ̀, ó ṣe pàtàkì láti lóye ìṣẹ̀dá àti iṣẹ́ àwọn èròjà sẹ́ẹ̀lì wọ̀nyí. Àwọn ribosomes ọ̀fẹ́ jẹ́ àwọn ètò kékeré, granular tí a rí tí wọ́n ń léfòó ní cytoplasm, tí ó ń ṣe àkóso ìṣẹ̀dá àwọn protein nínú sẹ́ẹ̀lì náà. Wọn kò ní ètò tí ó ní membrane-bound, tí ó ń yà wọ́n sọ́tọ̀ kúrò nínú àwọn ribosomes tí a so mọ́ endoplasmic reticulum. Yíya àwọn ribosomes ọ̀fẹ́ sọ́tọ̀ fún òye jíjinlẹ̀ nípa àwọn ipa pàtàkì wọn nínú ìṣẹ̀dá amuaradagba sẹ́ẹ̀lì.
II. Àwọn Ìlànà ti Síntífọ́ọ̀gì:
Ìmọ́lẹ̀ jẹ́ ọ̀nà tí a ń lò láti ya àwọn ẹ̀yà ara sẹ́ẹ̀lì onírúurú sọ́tọ̀ gẹ́gẹ́ bí ìwọ̀n wọn, ìwọ̀n wọn, àti ìwọ̀n mókúlà. Ó ní í ṣe pẹ̀lú lílo agbára centrifugal, tí a ń ṣe nípasẹ̀ àwọn àpẹẹrẹ yíyípo ní iyàrá gíga, láti ya àwọn ìdọ̀tí sẹ́ẹ̀lì, àwọn organelles, àti àwọn macromolecules sọ́tọ̀. Láti ṣe àṣeyọrí ìyàsọ́tọ̀ àwọn ribosomes ọ̀fẹ́, ó ṣe pàtàkì láti mú kí iyàsọ́tọ̀ centrifuge àti àkókò rẹ̀ sunwọ̀n síi, nítorí pé àwọn kókó wọ̀nyí ní ipa pàtàkì lórí bí a ṣe ń ya àwọn ẹ̀yà ara sọ́tọ̀.
III. Ṣíṣe àtúnṣe sí iyàrá centrifuge:
A. Ṣíṣàyẹ̀wò àwọn iyàrá iyàrá:
Pinnu iyara centrifuge to yẹ fun yiya awọn ribosomes ọfẹ kuro da lori ọpọlọpọ awọn okunfa, pẹlu iru ayẹwo ati ipele mimọ ti a fẹ. Ni gbogbogbo, awọn oluwadi n ṣiṣẹ laarin awọn iyara pupọ, bẹrẹ lati awọn iyara kekere si awọn idoti sẹẹli ti o tobi ati jijẹ diẹdiẹ. Iwọn iyara to dara julọ nigbagbogbo ṣubu laarin 10,000 si 100,000 xg, pẹlu awọn iyatọ ti o da lori awọn abuda ayẹwo pato.
B. Àwọn Àmì Àpẹẹrẹ:
Oríṣiríṣi sẹ́ẹ̀lì àti àsopọ ara ní oríṣiríṣi ìwọ̀n ribosome tó pọ̀. Fún àpẹẹrẹ, àwọn àsopọ ara tí wọ́n ní ìwọ̀n ìṣiṣẹ́ ara tó ga, bíi iṣan ara tàbí àwọn sẹ́ẹ̀lì ẹ̀dọ̀, sábà máa ń ní àwọn ribosomes tó pọ̀ sí i. Ó yẹ kí a ṣàtúnṣe iyàrá centrifuge náà gẹ́gẹ́ bí ó ṣe yẹ kí ó lè ní agbára ìyàsọ́tọ̀ tó yẹ.
IV. Àwọn ìlànà ìfàmọ́ra fún ìyàsọ́tọ̀ Ribosome ọ̀fẹ́:
A. Ìmúrasílẹ̀ Àpẹẹrẹ:
Láti lè ya àwọn ribosomes tí kò ní èéfín sọ́tọ̀ dáadáa, ìṣètò àpẹẹrẹ tó péye ṣe pàtàkì. Àwọn ọ̀nà ìfọ́ sẹ́ẹ̀lì, bíi sonication tàbí ìdènà sẹ́ẹ̀lì nípa lílo àwọn ohun ìfọ́, gbọ́dọ̀ jẹ́ kí a fi àwọn sẹ́ẹ̀lì náà fọ́ kí a sì tú àwọn ohun tí ó wà nínú wọn jáde. Lẹ́yìn náà, àwọn àpẹẹrẹ tí a ti lù náà máa ń gba àwọn ìgbésẹ̀ centrifugation láti yọ àwọn ìdọ̀tí kúrò, èyí tí yóò mú kí omi ara tí ó mọ́ kedere tí ó ní ribosomes jáde.
B. Ìyàtọ̀ centrifugation:
Ìwọ̀n centrifugation, ọ̀nà tí a sábà máa ń lò, ní ọ̀pọ̀lọpọ̀ ìyípo ìtẹ̀léra pẹ̀lú àwọn iyàrá centrifuge tí ń pọ̀ sí i. Ọ̀nà yìí ń jẹ́ kí àwọn olùwádìí ya àwọn ribosomes sọ́tọ̀ láti inú àwọn ẹ̀yà sẹ́ẹ̀lì mìíràn lọ́nà tí ó dára. Àwọn ìyípo iyàrá kékeré àkọ́kọ́ ń mú àwọn ìdọ̀tí sẹ́ẹ̀lì kúrò, lẹ́yìn náà ni àwọn iyàrá àárín yóò yọ àwọn organelles àti àwọn protein sẹ́ẹ̀lì tí ó tóbi jù kúrò. Níkẹyìn, a ń lo àwọn ìyípo iyàrá gíga láti gba ìpín tí a fẹ́ tí ó kún fún àwọn ribosomes ọ̀fẹ́.
C. Ìfàmọ́ra Onípele-gígùn:
Ìwọ̀n ìfàsẹ́yìn onípele-gíga máa ń lo àwọn èròjà ìfàsẹ́yìn onípele-gíga, bíi sucrose tàbí cesium chloride, láti ya àwọn ribosomes sọ́tọ̀ gẹ́gẹ́ bí ìwọ̀n ìfàsẹ́yìn wọn. Nípa fífi àyẹ̀wò náà sí orí ìwọ̀n ìfàsẹ́yìn onípele-gíga àti centrifuging ní iyàrá tí a ṣàkóso, a lè ya àwọn ribosomes sọ́tọ̀ pẹ̀lú ìpele tí ó pọ̀ sí i. Ọ̀nà yìí ń fúnni ní ìmọ́tótó tí ó dára sí i, ó sì ń gba àwọn oríṣiríṣi ribosome láàyè láti ya ara wọn sọ́tọ̀ gẹ́gẹ́ bí ìwọ̀n ìfàsẹ́yìn wọn.
V. Àwọn Ohun Tó Níí Ṣe Pẹ̀lú Ìṣàtúnṣe Ìyára Centrifuge:
A. Iwọn apẹẹrẹ:
Iwọn ti ayẹwo naa ni ipa pataki lori iṣapeye iyara centrifuge. Awọn iwọn ti o tobi ju le nilo awọn akoko centrifuge gigun tabi awọn iyara ti o ga julọ lati rii daju pe iyapa to peye. Sibẹsibẹ, o ṣe pataki lati ṣe akiyesi pe iyara pupọ tabi awọn akoko centrifuge gigun le ja si ibajẹ ribosome ati pe o ni ipa lori awọn idanwo atẹle.
B. Irú Rotor:
Àwọn rotor centrifuge ọ̀tọ̀ọ̀tọ̀ ní àwọn ààlà iyàrá tó yàtọ̀ síra àti agbára rotor tó pọ̀jù tí a dámọ̀ràn. Yíyan rotor tó yẹ ṣe pàtàkì láti yẹra fún ìbàjẹ́ ẹ̀rọ àti láti pa ìyàsọ́tọ̀ tó péye mọ́. Ó ṣe pàtàkì láti wo ìwé ìtọ́ni olùlò centrifuge àti àwọn àbá olùpèsè nígbà tí a bá ń yan irú rotor ní ìbámu pẹ̀lú iyàrá àti ìwọ̀n àpẹẹrẹ tí a fẹ́.
Ìparí:
Ṣíṣe àtúnṣe iyàrá centrifuge ṣe pàtàkì fún yíyà àwọn ribosomes ọ̀fẹ́ tí ó yọrí sí rere, tí ó ń jẹ́ kí ìkẹ́kọ̀ọ́ ipa wọn nínú ìṣẹ̀dá amuaradagba sẹ́ẹ̀lì jẹ́ èyí tí ó lágbára. Nípa títẹ̀lé àwọn ìlànà pàtó àti gbígbé àwọn ànímọ́ àpẹẹrẹ yẹ̀ wò, àwọn olùwádìí lè ya àwọn ribosomes ọ̀fẹ́ sọ́tọ̀ lọ́nà tí ó dára, kí wọ́n lè fún wọn ní òye tó ṣeyebíye nípa iṣẹ́ wọn àti ìbáṣepọ̀ wọn láàárín àyíká sẹ́ẹ̀lì.
.