hafainganam-pandehan'ny centrifuge mba hanasarahana ribosomes afaka

Hafainganam-pandehan'ny "Cenrifuge" hanasarahana ny ribosomes afaka: Teknika tena ilaina amin'ny fikarohana momba ny biolojia molekiola

Fampidirana:

Mitana anjara toerana lehibe amin'ny fananganana proteinina ny ribosome afaka, ary ny fanasarahana azy ireo amin'ny singa sela hafa dia asa fototra amin'ny fikarohana momba ny biolojia molekiola. Ity lahatsoratra ity dia mikaroka ny maha-zava-dehibe ny hafainganam-pandehan'ny centrifuge amin'ny fanasarahana ny ribosome afaka ary manasongadina ireo fomba fiasa sy fiheverana isan-karazany amin'ity dingana ity.

I. Fahatakarana ny Ribosomes Maimaimpoana:

Mba hahatakarana ny maha-zava-dehibe ny hafainganam-pandehan'ny centrifuge amin'ny fanasarahana ireo ribosome afaka, dia tena ilaina ny mahatakatra ny toetra sy ny asan'ireo singa sela ireo. Ny ribosome afaka dia rafitra kely sy granular hita mitsingevana malalaka ao amin'ny cytoplasm, tompon'andraikitra amin'ny fananganana proteinina ao anatin'ny sela. Tsy manana rafitra mifamatotra amin'ny membrane izy ireo, izay mampiavaka azy ireo amin'ny ribosome miraikitra amin'ny reticulum endoplasmic. Ny fanasarahana ny ribosome afaka dia ahafahana mahatakatra lalindalina kokoa ny anjara asany lehibe amin'ny famokarana proteinina ao amin'ny sela.

II. Fitsipiky ny Centrifugation:

Teknika ampiasaina betsaka ny "centrifugation" mba hanasarahana ireo singa sela samihafa mifototra amin'ny habeny, ny hakitroky ary ny lanjan'ny molekiolany. Tafiditra amin'izany ny fampiharana ny hery "centrifugal", izay ateraky ny fihodinan'ny santionany amin'ny hafainganam-pandeha avo lenta, mba hanasarahana ny poti-javatra sela, ny organelles ary ny macromolecules. Mba hahatratrarana ny fanasarahana ny ribosomes afaka, dia tena ilaina ny manatsara ny hafainganam-pandeha sy ny faharetan'ny "centrifuge", satria ireo anton-javatra ireo dia misy fiantraikany lehibe amin'ny fahombiazan'ny fanasarahana.

III. Fanatsarana ny hafainganam-pandehan'ny centrifuge:

A. Fikarohana ny elanelan'ny hafainganam-pandeha:

Miankina amin'ny anton-javatra maro ny famaritana ny hafainganam-pandehan'ny centrifuge mety amin'ny fanasarahana ny ribosomes afaka, anisan'izany ny karazana santionany sy ny haavon'ny fahadiovana irina. Amin'ny ankapobeny, miasa ao anatin'ny hafainganam-pandeha midadasika ny mpikaroka, manomboka amin'ny hafainganam-pandeha ambany ka hatramin'ny fanadiovana ireo poti-javatra lehibe kokoa ary mitombo tsikelikely. Ny hafainganam-pandeha tsara indrindra dia matetika eo anelanelan'ny 10.000 sy 100.000 xg, miaraka amin'ny fiovaovana mifototra amin'ny toetran'ny santionany manokana.

B. Toetra mampiavaka ny santionany:

Samy hafa ny habetsahan'ny ribosome ao amin'ny sela sy ny sela tsirairay. Ohatra, ny sela manana tahan'ny metabolisma ambony kokoa, toy ny sela hozatra na aty, dia mazàna misy ribosome bebe kokoa. Mila amboarina araka izany ny hafainganam-pandehan'ny centrifuge mba hahazoana ny fahombiazan'ny fisarahana irina.

IV. Fomba fiasa amin'ny centrifugation ho an'ny fanasarahana ny ribosome maimaim-poana:

A. Fanomanana santionany:

Mba hahafahana manavaka tsara ireo ribosome afaka, dia tena ilaina ny fanomanana santionany araka ny tokony ho izy. Ny teknika lysis sela, toy ny sonication na ny fanakorontanana sela amin'ny fampiasana savony, dia tsy maintsy ampiharina mba hanapahana ireo sela misokatra sy hamoahana ny ao anatiny. Aorian'izay, ireo santionany lysis dia mandalo andiana dingana centrifugation mba hanesorana ny poti-javatra, ka ahazoana supernatant mazava misy ribosome.

B. Fampidirana amin'ny alalan'ny centrifugation samihafa:

Ny centrifugation differential, teknika ampiasaina matetika, dia misy fihodinana maromaro mifanesy amin'ny hafainganam-pandehan'ny centrifuge mitombo. Ity fomba ity dia ahafahan'ny mpikaroka manavaka ny ribosomes amin'ny singa sela hafa amin'ny fomba mahomby. Ny fihodinana ambany dia manala ny poti-sela, arahin'ny hafainganam-pandeha antonony mba hanavahana ny organelles sy ny proteinina sela lehibe kokoa. Farany, ny fihodinana avo dia ampiasaina mba hahazoana ny ampahany irina manankarena amin'ny ribosomes afaka.

C. Fanesorana miolikolika:

Mampiasa fitaovana misy "density gradient" ny "gradient centrifugation", toy ny "sucrose" na "césium chloride", mba hanasarahana ny ribosomes araka ny hakitroky ny ranony. Amin'ny fametrahana ny santionany eo amin'ny "density gradient" sy ny "centrifuge" amin'ny hafainganam-pandeha voafehy, dia azo sarahina ny ribosomes miaraka amin'ny "resolution" avo kokoa. Ity teknika ity dia manolotra fahadiovana tsara kokoa ary ahafahana manavaka ireo karazana ribosomes samihafa araka ny tahan'ny sedimentation-ny.

V. Ireo anton-javatra misy fiantraikany amin'ny fanatsarana ny hafainganam-pandehan'ny centrifuge:

A. Haben'ny santionany:

Ny haben'ny santionany dia misy fiantraikany lehibe amin'ny fanatsarana ny hafainganam-pandehan'ny centrifuge. Ny haben'ny santionany lehibe kokoa dia mety mitaky fotoana centrifuge lava kokoa na hafainganam-pandeha ambony kokoa mba hahazoana antoka fa ampy ny fisarahana. Na izany aza, zava-dehibe ny manamarika fa ny hafainganam-pandeha tafahoatra na ny fotoana centrifuge lava kokoa dia mety hiteraka fahasimban'ny ribosome ary hisy fiantraikany amin'ny andrana manaraka.

B. Karazana Rotor:

Samy hafa ny fetran'ny hafainganam-pandeha sy ny fahafahan'ny rotor ambony indrindra atolotra ho an'ny rotor samihafa. Zava-dehibe ny fisafidianana rotor mety mba hisorohana ny fahasimban'ny fitaovana sy hitazonana ny fisarahana marina. Zava-dehibe ny mijery ny boky torolalana ho an'ny mpampiasa ny centrifuge sy ny tolo-kevitry ny mpanamboatra rehefa misafidy karazana rotor mifototra amin'ny hafainganam-pandeha sy ny habetsaky ny santionany irina.

Fehin-kevitra:

Ny fanatsarana ny hafainganam-pandehan'ny centrifuge dia tena ilaina amin'ny fanasarahana mahomby ny ribosomes afaka, izay ahafahana mandalina ny anjara asany amin'ny fananganana proteinina ao amin'ny sela. Amin'ny fanarahana ireo protocole manokana sy ny fandinihana ny toetran'ny santionany, dia afaka manavaka tsara ny ribosomes afaka ireo mpikaroka, ka manome fahatakarana sarobidy momba ny asany sy ny fifandraisany ao anatin'ny tontolo sela.