ရိုင်ဗိုဆုမ်းများကို ခွဲထုတ်ရန် စင်ထရီဖျျု့ချ်အမြန်နှုန်း ဘယ်လောက်ရှိလဲ

ရိုင်ဗိုဆုမ်းများကို ခွဲထုတ်ရန် စင်ထရီဖျူးဂျ်အမြန်နှုန်း- မော်လီကျူးဇီဝဗေဒသုတေသနအတွက် မရှိမဖြစ်နည်းပညာ

မိတ်ဆက်:

အလွတ်ရိုင်ဗိုဆုမ်းများသည် ပရိုတင်းပေါင်းစပ်မှုတွင် အရေးပါသောအခန်းကဏ္ဍမှ ပါဝင်ပြီး ၎င်းတို့ကို အခြားဆဲလ်အစိတ်အပိုင်းများမှ ခွဲထုတ်ခြင်းသည် မော်လီကျူးဇီဝဗေဒသုတေသနတွင် အခြေခံလုပ်ငန်းတစ်ခုဖြစ်သည်။ ဤဆောင်းပါးသည် အလွတ်ရိုင်ဗိုဆုမ်းများကို ခွဲထုတ်ရာတွင် စင်ထရီဖျျု့ချ်အမြန်နှုန်း၏ အရေးပါမှုကို စူးစမ်းလေ့လာပြီး ဤလုပ်ငန်းစဉ်အတွက် ကွဲပြားသော လုပ်ထုံးလုပ်နည်းများနှင့် ထည့်သွင်းစဉ်းစားရမည့်အချက်များကို မီးမောင်းထိုးပြထားသည်။

I. အခမဲ့ ရိုင်ဗိုဆုမ်းများကို နားလည်ခြင်း-

အခမဲ့ ရိုင်ဗိုဆုမ်းများကို ခွဲထုတ်ရာတွင် centrifuge အမြန်နှုန်း၏ အရေးပါမှုကို နားလည်ရန်အတွက် ဤဆဲလ်အစိတ်အပိုင်းများ၏ သဘောသဘာဝနှင့် လုပ်ဆောင်ချက်များကို နားလည်ရန် အရေးကြီးပါသည်။ အခမဲ့ ရိုင်ဗိုဆုမ်းများသည် ဆဲလ်အတွင်း ပရိုတင်းများ ပေါင်းစပ်ဖွဲ့စည်းမှုအတွက် တာဝန်ရှိသော ဆိုက်တိုပလာဇမ်တွင် လွတ်လပ်စွာ ပေါလောမျောနေသော သေးငယ်ပြီး အမှုန်အမွှားဖွဲ့စည်းပုံများဖြစ်သည်။ ၎င်းတို့တွင် အမြှေးပါးဖြင့် ချည်နှောင်ထားသော ဖွဲ့စည်းပုံမရှိသောကြောင့် endoplasmic reticulum နှင့် တွယ်ဆက်ထားသော ရိုင်ဗိုဆုမ်းများနှင့် ခွဲခြားထားသည်။ အခမဲ့ ရိုင်ဗိုဆုမ်းများကို ခွဲထုတ်ခြင်းဖြင့် ဆဲလ်ပရိုတင်းထုတ်လုပ်မှုတွင် ၎င်းတို့၏ အရေးကြီးသော အခန်းကဏ္ဍများကို ပိုမိုနက်ရှိုင်းစွာ နားလည်နိုင်စေပါသည်။

II. ဗဟိုခွာခြင်း၏ အခြေခံမူများ-

centrifugation သည် ဆဲလ်အစိတ်အပိုင်းအမျိုးမျိုးကို ၎င်းတို့၏ အရွယ်အစား၊ သိပ်သည်းဆနှင့် မော်လီကျူးအလေးချိန်အပေါ် အခြေခံ၍ ခွဲထုတ်ရန် ကျယ်ကျယ်ပြန့်ပြန့်အသုံးပြုသည့် နည်းပညာတစ်ခုဖြစ်သည်။ ၎င်းတွင် ဆဲလ်အပျက်အစီးများ၊ organelles နှင့် macromolecules များကို ခွဲထုတ်ရန် မြင့်မားသောအမြန်နှုန်းဖြင့် လည်ပတ်ခြင်းဖြင့် ထုတ်ပေးသော centrifuge force ကို အသုံးချခြင်း ပါဝင်သည်။ free ribosomes များကို ခွဲထုတ်ရန်အတွက် centrifuge အမြန်နှုန်းနှင့် ကြာချိန်ကို အကောင်းဆုံးဖြစ်အောင် လုပ်ဆောင်ရန် အရေးကြီးပါသည်၊ အဘယ်ကြောင့်ဆိုသော် ဤအချက်များသည် ခွဲထုတ်မှုစွမ်းဆောင်ရည်ကို သိသိသာသာ သက်ရောက်မှုရှိသောကြောင့်ဖြစ်သည်။

III။ ဗဟိုခွာစက်အမြန်နှုန်း အကောင်းဆုံးဖြစ်အောင်ပြုလုပ်ခြင်း-

A. မြန်နှုန်းအပိုင်းအခြားများကို စူးစမ်းလေ့လာခြင်း-

ရိုင်ဗိုဆုမ်းများကို ခွဲထုတ်ရန်အတွက် သင့်လျော်သော စင်ထရစ်ဖျျု့အမြန်နှုန်းကို ဆုံးဖြတ်ခြင်းသည် နမူနာအမျိုးအစားနှင့် လိုချင်သော သန့်ရှင်းမှုအဆင့် အပါအဝင် အချက်များစွာပေါ်တွင် မူတည်ပါသည်။ ယေဘုယျအားဖြင့် သုတေသီများသည် အနိမ့်အမြန်နှုန်းမှစတင်၍ ပိုကြီးသော ဆဲလ်အပျက်အစီးများကို ရှင်းလင်းပြီး တဖြည်းဖြည်းတိုးမြှင့်ကာ ကျယ်ပြန့်သော အမြန်နှုန်းအပိုင်းအခြားအတွင်း လုပ်ဆောင်ကြသည်။ အကောင်းဆုံးအမြန်နှုန်းအပိုင်းအခြားသည် ပုံမှန်အားဖြင့် 10,000 မှ 100,000 xg အကြား ကျဆင်းပြီး သီးခြားနမူနာဝိသေသလက္ခဏာများပေါ် မူတည်၍ ကွဲပြားမှုများရှိသည်။

ခ။ နမူနာဝိသေသလက္ခဏာများ-

မတူညီသောဆဲလ်များနှင့် တစ်ရှူးများတွင် ရိုင်ဗိုဆုမ်းပေါများမှု အတိုင်းအတာအမျိုးမျိုးရှိသည်။ ဥပမာအားဖြင့်၊ ကြွက်သား သို့မဟုတ် အသည်းဆဲလ်များကဲ့သို့သော ဇီဝဖြစ်စဉ်နှုန်းမြင့်မားသော တစ်ရှူးများတွင် ရိုင်ဗိုဆုမ်းများ ပိုမိုပါဝင်သည်။ လိုချင်သော ခွဲထုတ်မှုစွမ်းဆောင်ရည်ရရှိရန် centrifuge အမြန်နှုန်းကို လိုက်လျောညီထွေဖြစ်အောင် ချိန်ညှိရန် လိုအပ်သည်။

IV။ အခမဲ့ ရိုင်ဗိုဆုမ်း ခွဲထုတ်ခြင်းအတွက် ဗဟိုခွာခြင်း ပရိုတိုကောများ-

က။ နမူနာပြင်ဆင်ခြင်း-

ရိုင်ဗိုဆုမ်းများကို အောင်မြင်စွာခွဲထုတ်ရန်အတွက် သင့်လျော်သောနမူနာပြင်ဆင်မှုသည် အရေးကြီးပါသည်။ ဆဲလ်ပြိုကွဲခြင်းနည်းပညာများ၊ ဥပမာ sonication သို့မဟုတ် ဆပ်ပြာများကိုအသုံးပြု၍ ဆဲလ်ပျက်စီးခြင်းကဲ့သို့သော ဆဲလ်ပြိုကွဲခြင်းနည်းပညာများကို ဆဲလ်များပွင့်ခြင်းကို ဖြိုခွဲပြီး ၎င်းတို့၏အရောအနှောများကို ထုတ်လွှတ်ရန် အသုံးပြုရမည်။ ထို့နောက်၊ ပြိုကွဲသွားသောနမူနာများသည် အပျက်အစီးများဖယ်ရှားရန်အတွက် centrifugation အဆင့်များကို ဖြတ်သန်းရပြီး ရိုင်ဗိုဆုမ်းများပါ၀င်သော ကြည်လင်သော supernatant ကို ရရှိစေပါသည်။

ခ။ ဒစ်ဖရန်ရှယ် ဆင့်ထရီဖူဂန့်စ်

အသုံးများသော နည်းပညာတစ်ခုဖြစ်သည့် ဒစ်ဖেলရယ် စင်ထရီဖျူးဂျ်တွင် စင်ထရီဖျူးဂျ်အမြန်နှုန်းများ မြှင့်တင်ခြင်းဖြင့် အစဉ်လိုက် လည်ပတ်မှုများစွာ ပါဝင်သည်။ ဤနည်းလမ်းသည် သုတေသီများအား အခြားဆဲလ်အစိတ်အပိုင်းများမှ ရိုင်ဗိုဆုမ်းများကို ထိရောက်စွာ ခွဲထုတ်နိုင်စေပါသည်။ ကနဦး အနိမ့်မြန်နှုန်း လည်ပတ်မှုများသည် ဆဲလ်အပျက်အစီးများကို ဖယ်ရှားပြီးနောက် အလယ်အလတ်မြန်နှုန်းများဖြင့် အော်ဂဲနယ်များနှင့် ပိုကြီးသော ဆဲလ်ပရိုတိန်းများကို ခွဲထုတ်သည်။ နောက်ဆုံးတွင်၊ အခမဲ့ရိုင်ဗိုဆုမ်းများတွင် ကြွယ်ဝသော လိုအပ်သော အပိုင်းအစကို ရရှိရန် မြန်နှုန်းမြင့် လည်ပတ်မှုများကို အသုံးပြုသည်။

ဂရက်ဒစ် ဗဟိုခွာခြင်း-

gradient centrifugation သည် ရိုင်ဗိုဆုမ်းများကို ၎င်းတို့၏ ပေါလောမျောနေသော သိပ်သည်းဆများအပေါ် အခြေခံ၍ ခွဲထုတ်ရန် sucrose သို့မဟုတ် cesium chloride ကဲ့သို့သော သိပ်သည်းဆ gradient မီဒီယာကို အသုံးပြုသည်။ နမူနာကို သိပ်သည်းဆ gradient ပေါ်တွင် အလွှာလိုက်တင်ပြီး ထိန်းချုပ်ထားသော အမြန်နှုန်းဖြင့် centrifuge လုပ်ခြင်းဖြင့် ရိုင်ဗိုဆုမ်းများကို ပိုမိုမြင့်မားသော resolution ဖြင့် ခွဲထုတ်နိုင်သည်။ ဤနည်းပညာသည် ပိုမိုကောင်းမွန်သော သန့်ရှင်းမှုကို ပေးစွမ်းပြီး ၎င်းတို့၏ အနည်ထိုင်နှုန်းအပေါ် အခြေခံ၍ မတူညီသော ရိုင်ဗိုဆုမ်း မျိုးကွဲများကို ခွဲထုတ်နိုင်စေပါသည်။

V. စင်ထရီဖျူးဂျ်အမြန်နှုန်း အကောင်းဆုံးဖြစ်အောင်ပြုလုပ်ခြင်းအပေါ် သက်ရောက်မှုရှိသောအချက်များ-

A. နမူနာပမာဏ:

နမူနာ၏ ထုထည်သည် centrifuge အမြန်နှုန်း အကောင်းဆုံးဖြစ်အောင် လုပ်ဆောင်ခြင်းအပေါ် သိသိသာသာ သက်ရောက်မှုရှိသည်။ နမူနာထုထည် ပိုများခြင်းသည် လုံလောက်သော ခွဲထုတ်မှုကို သေချာစေရန်အတွက် centrifuge အချိန် ပိုရှည်ခြင်း သို့မဟုတ် ပိုမိုမြင့်မားသော အမြန်နှုန်းများ လိုအပ်နိုင်သည်။ သို့သော် အလွန်အကျွံ အမြန်နှုန်း သို့မဟုတ် centrifuge အချိန် ကြာရှည်ခြင်းသည် ribosome ပျက်စီးမှုကို ဖြစ်စေပြီး နောက်ဆက်တွဲ စမ်းသပ်ချက်များကို ထိခိုက်စေနိုင်ကြောင်း သတိပြုရန် အရေးကြီးပါသည်။

ခ။ ရိုတာအမျိုးအစား:

centrifuge rotors အမျိုးမျိုးတွင် မြန်နှုန်းကန့်သတ်ချက်များနှင့် အကြံပြုထားသော အများဆုံး rotor စွမ်းရည်များ ကွဲပြားသည်။ စက်ပစ္စည်းပျက်စီးမှုကို ရှောင်ရှားရန်နှင့် တိကျသော ခွဲထုတ်မှုကို ထိန်းသိမ်းရန်အတွက် သင့်လျော်သော rotor တစ်ခုကို ရွေးချယ်ခြင်းသည် အရေးကြီးပါသည်။ လိုချင်သောအမြန်နှုန်းနှင့် နမူနာပမာဏအပေါ် အခြေခံ၍ rotor အမျိုးအစားကို ရွေးချယ်သောအခါ centrifuge ၏ အသုံးပြုသူလက်စွဲနှင့် ထုတ်လုပ်သူ၏ အကြံပြုချက်များကို တိုင်ပင်ရန် အရေးကြီးပါသည်။

နိဂုံးချုပ်:

ဆဲလ်ပရိုတင်းပေါင်းစပ်မှုတွင် ၎င်းတို့၏အခန်းကဏ္ဍကို လေ့လာနိုင်စေရန်အတွက် စင်ထရီဖျျု့အမြန်နှုန်းကို အကောင်းဆုံးဖြစ်အောင်လုပ်ဆောင်ခြင်းသည် အလွန်အရေးကြီးပါသည်။ သတ်မှတ်ထားသော ပရိုတိန်းများကို လိုက်နာခြင်းနှင့် နမူနာဝိသေသလက္ခဏာများကို ထည့်သွင်းစဉ်းစားခြင်းဖြင့် သုတေသီများသည် ဆဲလ်ပတ်ဝန်းကျင်အတွင်း ၎င်းတို့၏လုပ်ဆောင်ချက်များနှင့် အပြန်အလှန်ဆက်သွယ်မှုများအပေါ် အဖိုးတန်သောထိုးထွင်းသိမြင်မှုများကို ပေးစွမ်းနိုင်ပြီး လွတ်လပ်သော ရိုင်ဗိုဆုမ်းများကို ထိရောက်စွာခွဲထုတ်နိုင်သည်။