Àwọn organelles méjì wo ni a kò le yà sọ́tọ̀ ní irọ̀rùn nípasẹ̀ centrifugation
Ìyàsọ́tọ̀ Sẹ́ẹ̀lì: Bíborí Ìpèníjà Pípín Nuclei àti Mitochondria Pínyà
Ifihan:
Ìmọ́lẹ̀ jẹ́ ọ̀nà alágbára kan tí a ń lò nínú ìmọ̀ nípa sẹ́ẹ̀lì àti molecule láti ya àwọn organelles onírúurú sọ́tọ̀ àti láti ya àwọn organelles kúrò nínú àdàpọ̀ onírúurú kan. Ìlànà náà dá lórí ìlànà ìṣọ̀kan ìyàtọ̀, níbi tí àwọn organelles tí ó wúwo jùlọ dúró sí ìsàlẹ̀ tube kan lábẹ́ agbára centrifugal. Síbẹ̀síbẹ̀, àwọn ìyàtọ̀ díẹ̀ wà sí òfin yìí, àti àwọn organelles méjì tí kò ní rọrùn láti yà sọ́tọ̀ nípasẹ̀ centrifugation ni nuclei àti mitochondria. Nínú àpilẹ̀kọ yìí, a ó ṣe àwárí àwọn ìpèníjà tí ó wà nínú yíyà àwọn organelles pàtàkì méjì wọ̀nyí sọ́tọ̀, pàtàkì ìwẹ̀nùmọ́ wọn nínú àwọn àyẹ̀wò kan, àti àwọn ọ̀nà míràn láti borí ìṣòro yìí.
1. Ìṣòro Nuclei àti Mitochondria:
Àwọn nukliu, tí a sábà máa ń pè ní àárín àṣẹ sẹ́ẹ̀lì, ló ń gbé àwọn ohun èlò ìbílẹ̀ kalẹ̀ àti ṣíṣàkóso ìfìhàn jínì. Ní ọwọ́ kejì ẹ̀wẹ̀, Mitochondria jẹ́ àwọn agbára pàtàkì tí ó ń mú agbára jáde ní ìrísí adenosine triphosphate (ATP). Nítorí ipa wọn tó yàtọ̀ síra àti àwọn ànímọ́ ìṣètò àrà ọ̀tọ̀, yíyà àwọn organelles méjèèjì yìí sọ́tọ̀ lè fa ìpèníjà pàtàkì.
2. Pàtàkì Ìwẹ̀nùmọ́ Àpapọ̀:
Bó tilẹ̀ jẹ́ pé ó lè jẹ́ ohun tó dára láti sọ àwọn ẹ̀yà ara kọ̀ọ̀kan di mímọ́ fún àwọn àyẹ̀wò pàtó, àwọn ìgbà kan wà tí ìfọmọ́ra àpapọ̀ ti nuclei àti mitochondria jẹ́ pàtàkì jùlọ. Fún àpẹẹrẹ, nígbà tí a bá ń kẹ́kọ̀ọ́ nípa ìlànà ìfọmọ́ra jínì ní ìdáhùn sí àwọn ìyípadà nínú ìṣiṣẹ́ mitochondrial, ó ṣe pàtàkì láti ṣàyẹ̀wò ipa tí àìṣiṣẹ́ mitochondrial ní lórí ìfọmọ́ra jínì nuclei. Nínú irú àwọn ọ̀ràn bẹ́ẹ̀, ìyàsọ́tọ̀ àwọn nuclei kúrò nínú mitochondria yóò yọrí sí ìṣàyẹ̀wò tí kò pé àti àwọn ìtumọ̀ tí kò pé.
3. Àwọn Ààlà ti Ìwọ̀n Ìwọ̀n Àṣà Àṣà:
Àwọn ọ̀nà ìfàmọ́ra ìbílẹ̀ máa ń lo ìfàmọ́ra ìyípadà, èyí tí ó ní àwọn ìgbésẹ̀ ìfàmọ́ra ìyípadà ní oríṣiríṣi iyàrá láti ya àwọn organelles sọ́tọ̀ nípa ìwọ̀n àti ìwọ̀n. Ó bani nínú jẹ́ pé àwọn nucleus àti mitochondria ní àwọn ìwọ̀n ìdàpọ̀ àti àwọn ànímọ́ ìfàmọ́ra ìyípadà tí ó jọra, èyí tí ó mú kí ó fẹ́rẹ̀ẹ́ má ṣeé ṣe láti yà wọ́n sọ́tọ̀ nípa lílo ọ̀nà yìí nìkan. Èyí jẹ́ nítorí pé ìwọ̀n lipid tó ga nínú àwọn organelles méjèèjì ló pọ̀, èyí tí ó ń yọrí sí ìfàmọ́ra ìdàpọ̀ wọn tí ó jọra àti èyí tí ó ń yọrí sí ìfàmọ́ra ìdàpọ̀ nígbà ìfàmọ́ra.
4. Àwọn ọ̀nà míràn fún ìyàsọ́tọ̀:
Láti borí àwọn ìdíwọ́ centrifugation, àwọn olùwádìí ti ṣe àgbékalẹ̀ àwọn ọ̀nà míràn fún ìyàsọ́tọ̀ nuclei àti mitochondria. Ọ̀kan lára ọ̀nà bẹ́ẹ̀ ni density gradient centrifugation, èyí tí ó ń lo density gradient medium láti ṣẹ̀dá continuous gradient gradient. Nípa fífi ìṣọ́ra so homogenate pọ̀ mọ́ gradient náà àti centrifuging rẹ̀, a lè pín àwọn organelles sí orí bí wọ́n ṣe ń yára, èyí tí ó ń jẹ́ kí ìpínyà nuclei àti mitochondria náà rọrùn. Síbẹ̀síbẹ̀, láìka ìyàsọ́tọ̀ tí ó dára sí, ọ̀nà yìí lè gba àkókò púpọ̀ sí i, ó sì ṣòro láti ṣe.
5. Àwọn ọ̀nà tó ga jùlọ: Àwọn ìlẹ̀kẹ̀ okùn àti àmì Fluorescent:
Ní àwọn ọdún àìpẹ́ yìí, àwọn ọ̀nà ìdàgbàsókè tó ní í ṣe pẹ̀lú àwọn ìlẹ̀kẹ̀ magnetic àti fluorescent tagging ti gbajúmọ̀ fún ìyàsọ́tọ̀ subcellular. Àwọn ìlẹ̀kẹ̀ magnetic tí a fi àwọn antibodies pàtó kan tí ó ń dojúkọ ojú ilẹ̀ tí ó wà lórí nuclei tàbí mitochondria bò ni a lè lò láti yan organelle kan láti ara èkejì. Jù bẹ́ẹ̀ lọ, nípa lílo àwọn àwọ̀ fluorescent pàtó tí a fojú sí nuclei tàbí mitochondria, a lè yan àwọn organelles nípa lílo àwọn specialized flow cytometers tàbí àwọn ẹ̀rọ fluorescence-activated cell sorting (FACS). Àwọn ìmọ̀ ẹ̀rọ tuntun wọ̀nyí ń fúnni ní ìṣedéédé àti ìṣiṣẹ́ tí kò tíì ṣẹlẹ̀ rí nínú ìyàsọ́tọ̀ àwọn organelles wọ̀nyí.
Ìparí:
Pípín nuclei àti mitochondria jẹ́ ìpèníjà nítorí pé wọ́n ní ìwọ̀n tó jọra àti pé wọ́n ní lipid tó pọ̀. Bó tilẹ̀ jẹ́ pé àwọn ọ̀nà centrifugation ìbílẹ̀ ń tiraka láti ṣe àṣeyọrí ìpínyà tó péye, àwọn ọ̀nà tó ti lọ síwájú bíi density gradient centrifugation, magnetic bead-based isolation, àti fluorescent tagging ti di irinṣẹ́ tó lágbára láti borí àwọn ìdènà wọ̀nyí. Àwọn ọ̀nà tuntun wọ̀nyí kì í ṣe pé wọ́n ń mú kí iṣẹ́ àti ìṣedéédé ìpínyà organelle sunwọ̀n sí i nìkan, wọ́n tún ń jẹ́ kí a ṣe àgbéyẹ̀wò gbogbo iṣẹ́ àti ìbáṣepọ̀ wọn, èyí sì ń ṣí ọ̀nà tuntun sílẹ̀ fún ìwádìí sẹ́ẹ̀lì àti molecular.
.