hore na li-organelle tse peli li ke ke tsa aroloa habonolo ke centrifugation

Karohano ea Lisele tse ka Tlase: Ho Hlōla Bothata ba ho Arohanya Nuclei le Mitochondria

Selelekela:

Ho Centrifugation ke mokhoa o matla o sebelisoang baelojing ea sele le ea limolek'hule ho arola le ho arola li-organelle tse fapaneng ho tsoa motswakong o fapaneng. Ts'ebetso ena e thehiloe molao-motheong oa ho sedimentation e fapaneng, moo li-organelle tse boima li lulang tlase ho tube tlas'a matla a centrifugal. Leha ho le joalo, ho na le mekhelo e 'maloa molaong ona,' me li-organelle tse peli tse sa arohaneng habonolo ka ho centrifugation ke li-nuclei le mitochondria. Sehloohong sena, re tla hlahloba liphephetso tse amehang ho aroleng li-organelle tsena tse peli tsa bohlokoa, bohlokoa ba ho hloekisa ha tsona hammoho litekong tse itseng, le mekhoa e meng ea ho hlola tšitiso ena.

1. Ho rarahana ha Nuclei le Mitochondria:

Nuclei, eo hangata e bitsoang setsi sa taelo sa sele, e ikarabella bakeng sa ho boloka thepa ea liphatsa tsa lefutso le ho laola tlhahiso ea liphatsa tsa lefutso. Ka lehlakoreng le leng, mitochondria ke matlo a bohlokoa a matla a hlahisang matla ka mokhoa oa adenosine triphosphate (ATP). Ka lebaka la mesebetsi ea tsona e ikhethang le litšobotsi tse ikhethang tsa sebopeho, ho arola li-organelle tsena tse peli ho ka baka phephetso e kholo.

2. Bohlokoa ba ho Hloekisa Hantle:

Leha ho ka ba molemo ho hlwekisa di-organelle ka bomong bakeng sa diteko tse ikgethang, ho na le maemo ao ho hlwekisa di-nuclei le mitochondria mmoho ho leng bohlokwa haholo. Mohlala, ha ho ithutwa taolo ya tlhahiso ya dijini ho arabela diphetohong tsa metabolism ya mitochondrial, ho ba bohlokwa ho sekaseka tshusumetso ya ho se sebetse hantle ha mitochondrial tlhahisong ya dijini tsa nyutlelie. Maemong a jwalo, karohano ya di-nuclei ho mitochondria e ka lebisa tlhahlobong e sa fellang le ditlhalosong tse sa nepahalang.

3. Meeli ea ho Fokotsa Matla ka ho Fetola Matla ka Mokhoa o Tloaelehileng:

Mekhoa ea setso ea ho centrifugation e sebelisa ho centrifugation e fapaneng, e kenyeletsang letoto la mehato ea ho centrifugation ka lebelo le fapaneng ho arola li-organelle ka boholo le bongata. Ka bomalimabe, li-nuclei le mitochondria li na le bongata bo tšoanang ba ho kopana le thepa e tšoanang ea ho sedimentation, e leng se etsang hore ho be thata ho li arola ka mokhoa ona feela. Sena se bakoa haholo-holo ke lipid tse ngata li-organelle ka bobeli, e leng se lebisang ho phaphametseng ha tsona ho tšoanang le ho fella ka ho kopana ha sedimentation nakong ea ho centrifugation.

4. Mekhoa e meng ea ho itšehla thajana:

Ho hlola mefokolo ea ho kopanya li-nucleus le li-mitochondria, bafuputsi ba hlahisitse mekhoa e meng ea ho arola li-nucleus le li-mitochondria. Mokhoa o mong o joalo ke ho kopanya li-nucleus le li-mitochondria ka bongata, e sebelisang mokhoa oa ho kopanya li-nucleus le li-mitochondria ka bongata ho etsa gradient e tsoelang pele. Ka ho beha homogenate ka hloko holim'a gradient le ho e kopanya ka bongata, li-organelle li ka aroloa ho latela ho phaphamala ha tsona, e leng se lumellang karohano e sebetsang hantle ea li-nucleus le li-mitochondria. Leha ho le joalo, ho sa tsotellehe karohano e ntlafalitsoeng, mokhoa ona o ka nka nako e telele 'me o thata ho o etsa.

5. Mekhoa e Tsoetseng Pele: Lifaha tsa Magnetic le Fluorescent Tagging:

Lilemong tsa morao tjena, mekhoa e tsoetseng pele e kenyeletsang lifaha tsa makenete le ho tšoaea fluorescent e fumane botumo bakeng sa karohano ea subcellular. Lifaha tsa makenete tse koahetsoeng ka li-antibodies tse itseng tse shebaneng le liprotheine tsa bokaholimo tse teng ho nuclei kapa mitochondria li ka sebelisoa ho arola organelle e 'ngoe ho e 'ngoe ka mokhoa o ikhethileng. Ho feta moo, ka ho sebelisa lidae tse khethehileng tsa fluorescent tse shebaneng le nuclei kapa mitochondria, li-organelle li ka hlophisoa ka ho sebelisa li-cytometer tse khethehileng tsa phallo kapa mechini ea ho hlophisa lisele tse sebetsang ka fluorescence (FACS). Mahlale ana a sejoale-joale a fana ka ho nepahala le bokhoni bo sa tloaelehang ho aroloeng ha li-organelle tsena.

Qetello:

Ho arola di-nuclei le mitochondria ke phephetso ka lebaka la ho tshwana ha tsona ka bongata le ho rua mafura. Le hoja mekgwa ya setso ya ho centrifugation e thatafallwa ke ho fihlella karohano e lekaneng, mekgwa e tswetseng pele jwalo ka density gradient centrifugation, magnetic bead-based isolation, le fluorescent tagging e hlahile e le disebediswa tse matla tsa ho hlola ditshitiso tsena. Mekhoa ena e metjha ha e ntlafatse feela bokgoni le ho nepahala ha karohano ya organelle empa hape e nolofalletsa tlhahlobo e felletseng ya mesebetsi le dikamano tsa yona, e bula ditsela tse ntjha tsa dipatlisiso tsa sele le tsa dimolek'hule.