organelles roa izay tsy azo sarahina mora foana amin'ny centrifugation

Fisarahana ambanin'ny sela: Fandresena ny fanamby amin'ny fanasarahana ny nokleary sy ny mitochondria

Fampidirana:

Teknika mahery vaika ampiasaina amin'ny biolojia sela sy molekiola ny centrifugation mba hanasarahana sy hanasarahana ireo organelles isan-karazany amin'ny fangaro tsy mitovy. Mifototra amin'ny fitsipiky ny sedimentation differential ny dingana, izay ipetrahan'ireo organelles mavesatra kokoa eo amin'ny faran'ny fantsona eo ambany herin'ny centrifugal. Na izany aza, misy tranga vitsivitsy maningana amin'ity fitsipika ity, ary organelles roa izay tsy mora misaraka amin'ny centrifugation dia ny nuclei sy ny mitochondria. Ato amin'ity lahatsoratra ity, dia hojerentsika ireo fanamby tafiditra amin'ny fanasarahana ireo organelles roa tena ilaina ireo, ny maha-zava-dehibe ny fanadiovana azy ireo amin'ny andrana sasany, ary fomba hafa handresena izany sakana izany.

1. Ny fahasarotan'ny nokleary sy ny mitochondria:

Ny nokleary, izay matetika antsoina hoe foibe fibaikoan'ny sela, no tompon'andraikitra amin'ny fitahirizana ny fitaovana fototarazo sy ny fandrindrana ny fanehoana ny fototarazo. Ny Mitochondria kosa dia loharanon-kery tena ilaina izay mamokatra angovo amin'ny endrika adenosine triphosphate (ATP). Noho ny anjara asany miavaka sy ny toetra mampiavaka ny firafiny, ny fanasarahana ireo organelles roa ireo dia mety hiteraka fanamby lehibe.

2. Ny maha-zava-dehibe ny fiaraha-manadio:

Na dia mety ho tsara aza ny manadio ireo taova tsirairay ho an'ny fanandramana manokana, dia misy tranga izay tena ilaina ny fiaraha-manadio ny nokleary sy ny mitochondria. Ohatra, rehefa mandalina ny fandrindrana ny fanehoana ny fototarazo ho setrin'ny fiovan'ny metabolisman'ny mitochondria, dia lasa zava-dehibe ny famakafakana ny fiantraikan'ny tsy fahatomombanan'ny mitochondria amin'ny fanehoana ny fototarazo nokleary. Amin'ny tranga toy izany, ny fisarahana ny nokleary amin'ny mitochondria dia hitarika amin'ny fanadihadiana tsy feno sy fandikana tsy marina.

3. Ny fetran'ny fampiasana "Cenrifugation" mahazatra:

Mampiasa "centrifugation" samihafa ny fomba "centrifugation" nentim-paharazana, izay misy andiana dingana "centrifugation" amin'ny hafainganam-pandeha samihafa mba hanasarahana ireo organelle araka ny habeny sy ny hakitroky. Indrisy anefa fa mifanipaka ny hakitroky ny nokleary sy ny mitochondria ary mitovy ny toetran'ny sedimentation, ka saika tsy azo sarahina amin'ny fampiasana io fomba fiasa io irery. Izany dia vokatry ny habetsahan'ny lipida ao amin'ireo organelle roa ireo, izay mitarika amin'ny fitoviana amin'ny fitsokan'izy ireo ary miteraka fiaraha-miempo mandritra ny "centrifugation".

4. Teknika hafa ho an'ny fitokana-monina:

Mba handresena ireo fetran'ny centrifugation, dia namorona teknika hafa ho an'ny fanasarahana ny nokleary sy ny mitochondria ireo mpikaroka. Ny iray amin'ireo fomba ireo dia ny centrifugation density gradient, izay mampiasa fitaovana density gradient mba hamoronana gradient mitohy. Amin'ny alàlan'ny fametrahana tsara ny homogenate eo ambonin'ny gradient sy ny centrifugation azy, dia azo zaraina araka ny fisondrotany ireo organelles, ka ahafahana manasaraka ny nokleary sy ny mitochondria amin'ny fomba mahomby kokoa. Na izany aza, na dia eo aza ny fanasarahana nohatsaraina, dia mety haharitra ela kokoa ity fomba ity ary ho sarotra kokoa ny manatanteraka azy.

5. Fomba fiasa mandroso: Vakana magnetika sy fametahana marika fluorescent:

Tato anatin'ny taona vitsivitsy, niha-nalaza ny teknika mandroso izay mampiasa vakana magnetika sy fametahana marika fluorescent ho an'ny fisarahana ao anaty sela. Ny vakana magnetika voarakotra antikôra manokana mikendry ny proteinina ambonin'ny sela hita ao amin'ny nokleary na mitochondria dia azo ampiasaina hanasarahana organelle iray amin'ny iray hafa. Ankoatra izany, amin'ny alàlan'ny fampiasana loko fluorescent manokana mikendry ny nokleary na mitochondria, dia azo sokajiana amin'ny alàlan'ny cytometer mikoriana manokana na milina fanasokajiana sela fluorescence-activated (FACS) ireo organelle. Ireo teknolojia farany ireo dia manolotra fahamarinan-toerana sy fahombiazana tsy mbola nisy toy izany amin'ny fanasarahana ireo organelle ireo.

Fehin-kevitra:

Sarotra ny manasaraka ny nokleary sy ny mitochondria noho ny fitoviana hakitroky sy ny toetrany manankarena lipida. Na dia sahirana aza ny fomba fanasarahana nentim-paharazana mba hahazoana fisarahana sahaza, dia nipoitra ho fitaovana mahery vaika handresena ireo sakana ireo ny teknika mandroso toy ny fanasarahana ny gradient hakitroky, ny fanasarahana mifototra amin'ny vakana magnetika, ary ny fametahana fluorescent. Ireo fomba vaovao ireo dia tsy vitan'ny hoe manatsara ny fahombiazana sy ny fahamarinan'ny fanasarahana organelle fa ahafahana mamakafaka tanteraka ny asany sy ny fifandraisany, manokatra lalana vaovao ho an'ny fikarohana sela sy molekiola.