Differential centrifugation e arola li-organelle joang

Ho Centrifugation e Fapaneng: Ho Senola Liphiri tsa Organelles

Selelekela

Ho arola dipharologanyo ke mokhoa o matla o sebediswang dipatlisisong tsa baeloji ho arola dikarolo tsa sele ho latela boholo le bongata ba tsona. E bapala karolo ya bohlokwa ho hlakiseng mesebetsi le dikamano tsa di-organelle tse fapaneng ka hara disele. Ka ho beha di-homogenate tsa sele letotong la mehato e latellanang ya ho arola dipharologanyo ka lebelo le fapaneng, bo-rasaense ba ka arola di-organelle ka katleho le ho di arola, ba bula tsela bakeng sa tlhahlobo e tebileng. Sehloohong sena, re tla hlahloba melao-motheo, mekgwa le tshebediso ya ho arola dipharologanyo ka tsela e fapaneng, re hlakisetse kamoo e thusang karohano le thuto ya di-organelle.

I. Molao-motheo oa Phapang ea Centrifugation

Ho arola dipharologanyo ho sebedisa dipharologanyo tsa boholo, sebopeho le bongata hara dikarolo tsa sele ho di arola. Ka ho sebedisa matla a centrifugal, dikarolo di ka arolwa ho latela sekgahla sa tsona sa ho senyeha ha mobu. Tsamaiso ena e kenyelletsa mehato e mmalwa ya ho arola dipharologanyo ka lebelo le phahameng hanyane ka hanyane, e leng se dumellang ho arolwa butle-butle ha di-organelle tse fapaneng.

II. Ho Theha Protocol ea Differential Centrifugation

Ho etsa differential centrifugation ka katleho, bafuputsi ba tlameha ho rala ka hloko protocol e ntlafatsang karohano ya di-organelle. Sena se kenyeletsa ho kgetha lebelo, nako, mocheso le bohareng bo loketseng. Ho feta moo, ho sebedisa di-buffer tse nepahetseng le ho netefatsa ho tshwana ha sampole ho bohlokwa ho qoba ho fetofetoha ha diteko.

III. Mehato ea Phapang ea ho Fokotsa Bophahamo

1. Mohato oa 1: Homogenization

Mohato oa pele oa ho arola lisele ka mokhoa o fapaneng ke homogenization, moo lisele kapa lisele li sitisoang ho lokolla likarolo tsa tsona. Sena hangata se finyelloa ka mekhoa ea mechini, joalo ka ho sila kapa ho etsa sonication, ho etsa sele e emisitsoeng kapa e homogenate.

2. Mohato oa 2: Ho Fokotsa ho Centrifugation ka Lebelo le Tlase

Homogenate e kenngoa mohatong oa ho centrifugation ka lebelo le tlase ho tlosa lithōle tsa sele le lisele tse sa robehang. Ho centrifugation ka boima ba hoo e ka bang 1,000 ho isa ho 2,000 × g ka nako e khuts'oane ho etsa hore thepa e boima e be pellet, e siea supernatant e ruileng ka li-organelle tse sa senyehang.

3. Mohato oa 3: Phapang ea ho Fokotsa ho Fapana

Supernatant e fumanweng mohatong wa centrifugation wa lebelo le tlase hamorao e fetisetswa ho tube e ntjha mme e kenngwa centrifugation ya lebelo le hodimo. Mohato ona o ikemiseditse ho arola di-organelle ho latela bongata ba tsona. Mitochondria, mohlala, hangata e pellet ka lebelo le tlohang ho 6,000 ho isa ho 10,000 × g, ha di-organelle tse ding di ntse di le ka hara supernatant.

4. Mohato oa 4: Karolo e 'Ngoe e Eketsehileng

Ho arola di-organelle tse itseng kapa ho rarolla dikarolwana tse ka tlase ho sele, ho ka etswa potoloho e nngwe ya ho centrifugation e fapaneng. Sena se kenyeletsa ho nka supernatant mohatong o fetileng le ho e beha tlasa matla a phahameng le ho feta a centrifugal. Ka ho lokisa lebelo le bolelele ba nako, bafuputsi ba ka ntlafatsa di-organelle tse itseng le ho fokotsa tshilafatso.

5. Mohato oa 5: Tlhoekiso le Tlhahlobo

Kamora ho arola ka dipharologanyo, dikarolwana tse ruisitsweng ka di-organelle tse itseng di ka hlwekiswa ka ho eketsehileng ho sebediswa mekgwa e meng e kang ho arola ka bongata kapa ho sireletsa mmele. Qetellong, di-organelle tse arohaneng di ka hlaloswa ka botlalo ho sebediswa microscopy, proteomics, genomics, kapa mekgwa e meng e ikgethang.

IV. Litšebeliso tsa Differential Centrifugation

Ho kopanya lisele tse fapaneng ho sebetsa e le mokhoa oa bohlokoa mafapheng a fapaneng a mahlale a bophelo. Litšebeliso tsa eona li atile, ho tloha lipatlisisong tsa motheo tsa lisele ho ea lithutong tsa tlhahlobo le kalafo. Mona ke lits'ebetso tse 'maloa tse hlahelletseng:

1. Ho batlisisa Mesebetsi ea Organelle

Ho arola dipharologanyo ho dumella bafuputsi ho fumana di-organelle tse hlwekisitsweng, ho thusa ho hlalosa mesebetsi ya tsona ya mmele. Ka ho ithuta di-organelle tse arohaneng, bo-rasaense ba ka hlalosa mesebetsi ya tsona ditshebetsong tse kang metabolism, tlhahiso ya protheine, tlhahiso ya matla le homeostasis ya sele.

2. Ho Hlahloba Mekhoa ea Mafu

Ho utloisisa hore na mafu a ama sebopeho le ts'ebetso ea li-organelle joang ho bohlokoa bakeng sa ho nts'etsapele mekhoa ea phekolo. Ho arola li-organelle ka mokhoa o fapaneng ho ka sebelisoa ho bapisa li-organelle ho tsoa liseleng tse phetseng hantle le tse kulang, ho fana ka temohisiso mabapi le mekhoa ea mafu le lipheo tse ka bang teng tsa phekolo.

3. Ho Batlisisa Nts'etsopele ea Lisele

Nakong ea ho thehoa ha lesea kapa ho kheloha ha lisele, tlhophiso le sebopeho sa li-organelle lia fetoha. Ho arola lisele ka mokhoa o fapaneng ho lumella bafuputsi ho hlahloba liphetoho tsena tse matla, ho senola lits'ebetso tse rarahaneng tse amehang nts'etsopele le ho kheloha ha lisele.

4. Ho Khetholla Li-biomarker

Ho kopanya dipharologanyo tsa diphedi hammoho le tlhahlobo ya proteomic ke sesebediswa sa bohlokwa bakeng sa ho hlwaya di-biomarker tse amanang le mafu a fapaneng. Ka ho ithuta di-organelle, bafuputsi ba ka sibolla diprotheine tse fumanehang sebakeng se itseng kapa tse fetotsweng maemong a ho kula, ho thusa ho fumana tlhahlobo ya pele le ho beha leihlo kalafo.

5. Mekhoa ea ho Fana ka Lithethefatsi

Lefapheng la ho fana ka meriana, ho utloisisa hore na bajari ba meriana ba sebelisana joang le li-organelle tse fapaneng hoa hlokahala. Ho arola li-organelle tse fapaneng ho nolofalletsa ho arola li-organelle tse reretsoeng, ho fana ka temohisiso mabapi le sebaka seo lithethefatsi li leng ho sona, mekhoa ea ho li lokolla le matšoenyeho a ka bang teng a chefo.

Qetello

Ho arola di-organelle ka tsela e fapaneng ho bapala karolo ya bohlokwa ho aroleng di-organelle, ho dumella bafuputsi ho senola mesebetsi ya bona, dibopeho le mesebetsi ya bona ditsamaisong tsa sele. Ka ho rala ka hloko diprothokholo le ho sebedisa mehato e latellanang ya ho arola di-centrifugation, bo-rasaense ba ka ntlafatsa disampole tsa bona bakeng sa di-organelle tse itseng, ho thusa ho sekaseka le ho hlahloba dikarolo tsena tsa bohlokwa tsa sele. Ha theknoloji e ntse e tswela pele ho tswela pele, ho arola di-centrifugation ka tsela e fapaneng ntle ho pelaelo ho tla dula e le mokgwa wa motheo wa baeloji ya sele, ho nolofalletsa ho sibolla le ho ntshetsa pele mafapheng a fapaneng a dipatlisiso.