Ahoana no fomba fisarahan'ny centrifugation differential organelles

Fanenjanana samihafa: Famahana ny tsiambaratelon'ny organelles

Sava lalana

Teknika mahery vaika ampiasaina amin'ny fikarohana biolojika ny centrifugation differential mba hanasarahana ireo singa sela mifototra amin'ny habeny sy ny hakitroky ny sela. Mitana anjara toerana lehibe amin'ny fanazavana ny fiasan'ny organelles isan-karazany ao anatin'ny sela izy io. Amin'ny alàlan'ny fampidirana andiana dingana centrifugation mifanesy amin'ny hafainganam-pandeha samihafa amin'ny sela homogenates, dia afaka manasaraka sy manasaraka ireo organelles ireo mpahay siansa, ka manokatra lalana ho an'ny fanadihadiana lalina. Ato amin'ity lahatsoratra ity, dia handinika ireo fitsipika, fomba ary fampiharana ny centrifugation differential isika, hanazavana ny fomba ahafahany manasaraka sy mandalina ireo organelles.

I. Ny Fitsipiky ny Centrifugation Differential

Mampiasa ny fahasamihafan'ny habe, ny endrika ary ny hakitroky eo amin'ireo singa sela ny "centrifugation" samihafa mba hanasarahana azy ireo. Amin'ny fampiasana hery "centrifugal", dia azo zaraina araka ny tahan'ny sedimentation-ny ireo singa. Ny fomba fiasa dia misy dingana "centrifugation" maromaro amin'ny hafainganam-pandeha ambony kokoa, izay ahafahana manasaraka tsikelikely ireo organelles miavaka.

II. Fametrahana Protocol momba ny Centrifugation Differential

Mba hanatanterahana tsara ny "differential centrifugation", dia tsy maintsy mamolavola tsara ny protocole izay manatsara ny fisarahan'ny organelles ireo mpikaroka. Izany dia mahakasika ny fisafidianana ny hafainganam-pandeha, ny faharetana, ny mari-pana ary ny fitaovana mety. Fanampin'izany, ny fampiasana "buffers" mety sy ny fiantohana ny fitoviana amin'ny santionany dia tena ilaina mba hisorohana ny fiovaovan'ny fanandramana.

III. Dingana samihafa amin'ny centrifugation

1. Dingana 1: Fampitoviana

Ny dingana voalohany amin'ny centrifugation differential dia ny homogenization, izay andravana ny sela na ny tavy mba hamoahana ireo singa ao aminy. Izany dia matetika tanterahina amin'ny alalan'ny fomba mekanika, toy ny fikosoham-bary na ny sonication, mba hamoronana fampiatoana na homogenate sela.

2. Dingana 2: Fampidirana amin'ny alalan'ny "Cenrifugation" amin'ny hafainganam-pandeha ambany

Ampiasaina amin'ny "centrifugation" miadana ny "homogenate" mba hanesorana ny poti-sela sy ny sela tsy vaky. Ny "centrifugation" eo amin'ny 1.000 ka hatramin'ny 2.000 × g eo ho eo mandritra ny fotoana fohy dia mahatonga ny akora mavesatra ho lasa poti-javatra, ka mamela "supernatant" manankarena organelles tsy vaky.

3. Dingana 3: Fampidirana amin'ny alalan'ny "Cenrifugation" samihafa

Ny ranoka azo avy amin'ny dingana centrifugation miadana dia afindra any anaty fantsona vaovao ary iharan'ny centrifugation haingam-pandeha kokoa. Ity dingana ity dia mikendry ny hanasaraka ireo organelles mifototra amin'ny hakitroky ny sela. Ny mitochondria, ohatra, dia mazàna mipoaka amin'ny hafainganam-pandeha manomboka amin'ny 6.000 ka hatramin'ny 10.000 × g, raha toa kosa ka mijanona ao anaty supernatant ny organelles hafa.

4. Dingana 4: Fizarana fanampiny

Mba hanasarahana ireo organelles manokana na hamahana ireo fizarana ambanin'ny sela, dia azo atao ny manao dingana hafa amin'ny centrifugation differential. Izany dia mitaky ny fakana ny supernatant avy amin'ny dingana teo aloha ary hampiharana azy amin'ny hery centrifugal avo kokoa. Amin'ny alàlan'ny fanatsarana ny hafainganam-pandeha sy ny faharetany, dia afaka manatsara ny organelles manokana ireo mpikaroka ary mampihena ny fahalotoana.

5. Dingana 5: Fanadiovana sy Famakafakana

Aorian'ny centrifugation differential, dia azo diovina bebe kokoa ireo ampahany nohatsaraina tamin'ny organelles manokana amin'ny alàlan'ny teknika fanampiny toy ny density gradient centrifugation na immunoprecipitation. Farany, ireo organelles mitokana dia azo faritana tsara amin'ny alàlan'ny mikroskopia, proteomics, genomics, na teknika manokana hafa.

IV. Fampiharana ny Centrifugation Differential

Ny centrifugation differential dia teknika fototra amin'ny sehatra samihafa amin'ny siansa momba ny fiainana. Miely patrana ny fampiharana azy, manomboka amin'ny fikarohana fototra momba ny sela ka hatramin'ny fandalinana diagnostika sy fitsaboana. Ireto misy fampiharana miavaka vitsivitsy:

1. Fanadihadiana ny asan'ny organelles

Ny centrifugation differential dia ahafahan'ny mpikaroka mahazo organelles voadio, manampy amin'ny famaritana ny asany ara-batana. Amin'ny alàlan'ny fandalinana ireo organelles mitokana, dia afaka mamaha ny anjara asany amin'ny dingana toy ny metabolisma, ny fananganana proteinina, ny famokarana angovo ary ny homeostasis sela ny mpahay siansa.

2. Fikarohana ny fomba fiasan'ny aretina

Tena ilaina amin'ny fampivoarana fitsaboana ny fahatakarana ny fiantraikan'ny aretina amin'ny rafitra sy ny asan'ny taova. Azo ampiasaina hampitahana ireo taova avy amin'ny sela salama sy marary ny centrifugation differential, mba hanomezana fahatakarana momba ny fomba fiasan'ny aretina sy ireo tanjona fitsaboana mety hitranga.

3. Fanadihadiana ny Fivoaran'ny Sela

Mandritra ny embryogenesis na ny fiforonan'ny sela, miova ny fandaminana sy ny firafitry ny organelles. Ny centrifugation differential dia ahafahan'ny mpikaroka mandinika ireo fiovana dinamika ireo, ka mamaha ireo dingana sarotra tafiditra amin'ny fivoarana sy ny fiforonan'ny sela.

4. Famantarana ireo mari-pamantarana biolojika

Ny centrifugation differential miaraka amin'ny fanadihadiana proteomika dia fitaovana sarobidy hamantarana ireo mari-pamantarana biolojika mifandraika amin'ny aretina isan-karazany. Amin'ny alàlan'ny fandalinana ireo organelles, ireo mpikaroka dia afaka mahita proteinina izay voafaritra manokana na miova amin'ny toe-javatra misy aretina, izay manampy amin'ny famaritana mialoha sy ny fanaraha-maso ny fitsaboana.

5. Rafitra fanaterana fanafody

Eo amin'ny sehatry ny fanaterana fanafody, tena ilaina ny mahatakatra ny fomba ifandraisan'ireo mpitondra fanafody amin'ireo organelle samihafa. Ny centrifugation differential dia ahafahana manasaraka ireo organelle kendrena, manome fahatakarana momba ny toerana misy ny fanafody, ny fomba famoahana azy, ary ny olana mety hitranga amin'ny poizina.

Famaranana

Mitana anjara toerana lehibe amin'ny fanasarahana ireo organelle ny centrifugation differential, ahafahan'ny mpikaroka mamaha ny asany, ny toetrany ary ny anjara asany amin'ny fizotran'ny sela. Amin'ny alàlan'ny famolavolana tsara ny protocole sy ny fampiasana dingana centrifugation mifanesy, dia afaka manatsara ny santionany ho an'ny organelles manokana ny mpahay siansa, ka manamora ny fanadihadiana sy ny fikarohana bebe kokoa momba ireo singa sela tena ilaina ireo. Rehefa mandroso hatrany ny teknolojia, dia tsy isalasalana fa hijanona ho teknika fototra amin'ny biolojian'ny sela ny centrifugation differential, ka ahafahana mahita sy mandroso bebe kokoa amin'ny sehatry ny fikarohana isan-karazany.