differential centrifugation က organelles တွေကို ဘယ်လိုခွဲထုတ်သလဲ
ဒစ်ဖရန်ရှယ် စင်ထရီဖူဂရှင်း- အော်ဂဲနယ်များ၏ လျှို့ဝှက်ချက်များကို ဖော်ထုတ်ခြင်း
မိတ်ဆက်
ဒစ်ဖেইရယ် ဆင့်ထရီဖူရှင်းသည် ဇီဝဗေဒဆိုင်ရာ သုတေသနတွင် အသုံးပြုသော အစွမ်းထက်သည့် နည်းပညာတစ်ခုဖြစ်ပြီး ဆဲလ်အစိတ်အပိုင်းများကို ၎င်းတို့၏ အရွယ်အစားနှင့် သိပ်သည်းဆအပေါ် အခြေခံ၍ ခွဲခြားရန် အသုံးပြုသည်။ ၎င်းသည် ဆဲလ်များအတွင်းရှိ အမျိုးမျိုးသော အင်္ဂါအစိတ်အပိုင်းများ၏ လုပ်ဆောင်ချက်များနှင့် အပြန်အလှန် ဆက်သွယ်မှုများကို ရှင်းလင်းစွာ ဖော်ပြရာတွင် အဓိကအခန်းကဏ္ဍမှ ပါဝင်သည်။ ဆဲလ် homogenates များကို မတူညီသော အမြန်နှုန်းများဖြင့် အစဉ်လိုက် ဆင့်ထရီဖူရှင်း အဆင့်များစွာသို့ လိုက်လံစေခြင်းဖြင့် သိပ္ပံပညာရှင်များသည် အင်္ဂါအစိတ်အပိုင်းများကို ထိရောက်စွာ ပိုင်းခြားနိုင်ပြီး ခွဲထုတ်နိုင်ပြီး နက်ရှိုင်းသော ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုအတွက် လမ်းခင်းပေးနိုင်သည်။ ဤဆောင်းပါးတွင်၊ ဒစ်ဖেইရယ် ဆင့်ထရီဖူရှင်း၏ မူများ၊ နည်းလမ်းများနှင့် အသုံးချမှုများကို ကျွန်ုပ်တို့ လေ့လာသွားမည်ဖြစ်ပြီး ၎င်းသည် အင်္ဂါအစိတ်အပိုင်းများကို မည်သို့ခွဲထုတ်ပြီး လေ့လာနိုင်စေသည်ကို မီးမောင်းထိုးပြပါမည်။
I. ဒစ်ဖရန်ရှယ် စင်ထရီဖူဂန့် ၏ အခြေခံမူ
ကွဲပြားသော ဗဟိုခွာအားစနစ်သည် ဆဲလ်အစိတ်အပိုင်းများအကြား အရွယ်အစား၊ ပုံသဏ္ဍာန်နှင့် သိပ်သည်းဆကွာခြားချက်များကို အသုံးချ၍ ၎င်းတို့ကို ခွဲထုတ်သည်။ ဗဟိုခွာအားများကို အသုံးပြုခြင်းဖြင့် အစိတ်အပိုင်းများကို ၎င်းတို့၏ အနည်ထိုင်နှုန်းအပေါ် အခြေခံ၍ အပိုင်းပိုင်းခွဲနိုင်သည်။ လုပ်ငန်းစဉ်တွင် တဖြည်းဖြည်းမြင့်မားသော အမြန်နှုန်းများဖြင့် ဗဟိုခွာအားစနစ် အဆင့်များစွာ ပါဝင်ပြီး ကွဲပြားသော အင်္ဂါအစိတ်အပိုင်းများကို တဖြည်းဖြည်း ခွဲထုတ်နိုင်သည်။
II. ဒစ်ဖ্যান্য ဗဟိုခွာစက် ပရိုတိုကောတစ်ခု ထူထောင်ခြင်း
ကွဲပြားသော ဗဟိုခွာအားကို ထိရောက်စွာ လုပ်ဆောင်ရန်အတွက် သုတေသီများသည် အင်္ဂါအစိတ်အပိုင်းများ ခွဲထုတ်ခြင်းကို အကောင်းဆုံးဖြစ်စေမည့် ပရိုတိုကောတစ်ခုကို ဂရုတစိုက် ဒီဇိုင်းထုတ်ရမည်။ ၎င်းတွင် သင့်လျော်သော အမြန်နှုန်း၊ ကြာချိန်၊ အပူချိန်နှင့် အလတ်စားကို ရွေးချယ်ခြင်း ပါဝင်သည်။ ထို့အပြင်၊ သင့်လျော်သော ဘာဖာများကို အသုံးပြုခြင်းနှင့် နမူနာ တစ်သားတည်းဖြစ်မှုကို သေချာစေခြင်းတို့သည် စမ်းသပ်မှု ကွဲပြားမှုများကို ရှောင်ရှားရန် အရေးကြီးပါသည်။
III. ဒစ်ဖရန်ရှယ် ဆင့်ခွဲထုတ်ခြင်း အဆင့်များ
၁။ အဆင့် ၁: တစ်သားတည်းဖြစ်အောင်ပြုလုပ်ခြင်း
ကွဲပြားသော ဗဟိုခွာအားစက်ဖြင့် ခွဲထုတ်ခြင်း၏ ပထမခြေလှမ်းမှာ တစ်သားတည်းဖြစ်အောင်ပြုလုပ်ခြင်းဖြစ်ပြီး ဆဲလ်များ သို့မဟုတ် တစ်ရှူးများကို ၎င်းတို့၏ အစိတ်အပိုင်းများကို ထုတ်လွှတ်ရန် အနှောင့်အယှက်ပေးခြင်းဖြင့် ပြုလုပ်သည်။ ၎င်းကို ဆဲလ်ဆိုင်းထိန်းစနစ် သို့မဟုတ် တစ်သားတည်းဖြစ်အောင် ဖန်တီးရန် ကြိတ်ခွဲခြင်း သို့မဟုတ် အသံဖြင့် လှုံ့ဆော်ခြင်းကဲ့သို့သော စက်ပိုင်းဆိုင်ရာနည်းလမ်းများမှတစ်ဆင့် ပုံမှန်အားဖြင့် အောင်မြင်သည်။
၂။ အဆင့် ၂: အနိမ့်မြန်နှုန်း ဗဟိုခွာခြင်း
ဆဲလ်အပျက်အစီးများနှင့် မပျက်စီးသေးသောဆဲလ်များကို ဖယ်ရှားရန်အတွက် homogenate ကို အနိမ့်ဆုံးအမြန်နှုန်း centrifugation အဆင့်ဖြင့် လုပ်ဆောင်သည်။ 1,000 မှ 2,000 × g ခန့်ဖြင့် အချိန်တိုအတွင်း centrifugation လုပ်ခြင်းသည် ပိုလေးသောပစ္စည်းကို အလုံးလိုက်ဖြစ်စေပြီး အင်္ဂါအစိတ်အပိုင်းများ ကြွယ်ဝသော supernatant ကို ချန်ထားခဲ့သည်။
၃။ အဆင့် ၃: ဒစ်ဖရန်ရှယ် စင်ထရီဖူဂန့်
အမြန်နှုန်းနိမ့် centrifugation အဆင့်မှရရှိသော supernatant ကို နောက်ပိုင်းတွင် ပြွန်အသစ်တစ်ခုသို့ လွှဲပြောင်းပြီး ပိုမိုမြင့်မားသော အမြန်နှုန်း centrifugation ပြုလုပ်သည်။ ဤအဆင့်သည် ၎င်းတို့၏ သိပ်သည်းဆအပေါ် အခြေခံ၍ organelles များကို ခွဲခြားရန် ရည်ရွယ်သည်။ ဥပမာအားဖြင့် မိုက်တိုခွန်ဒရီယာသည် ပုံမှန်အားဖြင့် 6,000 မှ 10,000 × g အထိ အမြန်နှုန်းဖြင့် pellet လုပ်လေ့ရှိပြီး အခြား organelles များမှာ supernatant တွင် ရှိနေကြသည်။
၄။ အဆင့် ၄: နောက်ထပ် အပိုင်းအစများ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်း
သတ်မှတ်ထားသော organelles များကို သီးခြားခွဲထုတ်ရန် သို့မဟုတ် subcellular compartments များကို ဖြေရှင်းရန်အတွက်၊ differential centrifugation ၏ နောက်ထပ်အဆင့်တစ်ခုကို လုပ်ဆောင်နိုင်သည်။ ၎င်းတွင် ယခင်အဆင့်မှ supernatant ကိုယူပြီး ပိုမိုမြင့်မားသော centrifugal force သို့ ပေးပို့ခြင်း ပါဝင်သည်။ အမြန်နှုန်းနှင့် ကြာချိန်ကို အသေးစိတ်ချိန်ညှိခြင်းဖြင့် သုတေသီများသည် သတ်မှတ်ထားသော organelles များကို ကြွယ်ဝစေပြီး ညစ်ညမ်းမှုကို လျှော့ချနိုင်သည်။
၅။ အဆင့် ၅: သန့်စင်ခြင်းနှင့် ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်း
ကွဲပြားသော ဗဟိုခွာရည်ခွဲပြီးနောက်၊ သီးခြား organelles များဖြင့် ကြွယ်ဝသော အပိုင်းအစများကို သိပ်သည်းဆ gradient ဗဟိုခွာရည်ခွဲခြင်း သို့မဟုတ် immunoprecipitation ကဲ့သို့သော အပိုနည်းပညာများကို အသုံးပြု၍ ထပ်မံသန့်စင်နိုင်သည်။ နောက်ဆုံးတွင်၊ သီးခြားခွဲထုတ်ထားသော organelles များကို အဏုကြည့်မှန်ပြောင်း၊ ပရိုတီအိုမစ်စ်၊ ဂျီနိုမစ်စ် သို့မဟုတ် အခြားအထူးပြုနည်းပညာများကို အသုံးပြု၍ သေချာစွာ လက္ခဏာရပ်ဖော်ပြနိုင်သည်။
IV. ဒစ်ဖရန်ရှယ် ဆင့်ထရီဖူရှင်း၏ အသုံးချမှုများ
ဒစ်ဖেইရယ် စင်ထရီဖူရှင်းသည် ဇီဝသိပ္ပံနယ်ပယ်အမျိုးမျိုးတွင် အဓိကနည်းပညာတစ်ခုအဖြစ် ဆောင်ရွက်ပါသည်။ ၎င်း၏အသုံးချမှုများသည် အခြေခံဆဲလ်သုတေသနမှ ရောဂါရှာဖွေရေးနှင့် ကုထုံးဆိုင်ရာလေ့လာမှုများအထိ ကျယ်ကျယ်ပြန့်ပြန့်ရှိပါသည်။ ထင်ရှားသောအသုံးချမှုအနည်းငယ်ကို အောက်တွင်ဖော်ပြထားပါသည်။
၁။ အော်ဂဲနစ်လုပ်ဆောင်ချက်များကို စုံစမ်းစစ်ဆေးခြင်း
ကွဲပြားသော ဗဟိုခွာအားစက်ဖြင့် လှည့်ပတ်ခြင်းဖြင့် သုတေသီများသည် သန့်စင်ထားသော အင်္ဂါအစိတ်များကို ရရှိနိုင်ပြီး ၎င်းတို့၏ ဇီဝကမ္မဗေဒဆိုင်ရာ လုပ်ဆောင်ချက်များကို ဖော်ထုတ်ရာတွင် အထောက်အကူ ပြုပါသည်။ သီးခြားခွဲထုတ်ထားသော အင်္ဂါအစိတ်များကို လေ့လာခြင်းဖြင့် သိပ္ပံပညာရှင်များသည် ဇီဝဖြစ်စဉ်၊ ပရိုတင်းပေါင်းစပ်မှု၊ စွမ်းအင်ထုတ်လုပ်မှုနှင့် ဆဲလ်တည်ငြိမ်မှုကဲ့သို့သော လုပ်ငန်းစဉ်များတွင် ၎င်းတို့၏ အခန်းကဏ္ဍများကို အဓိပ္ပာယ်ဖွင့်ဆိုနိုင်သည်။
၂။ ရောဂါယန္တရားများကို စူးစမ်းလေ့လာခြင်း
ရောဂါများသည် အင်္ဂါအစိတ်အပိုင်းများ၏ဖွဲ့စည်းပုံနှင့် လုပ်ဆောင်ချက်ကို မည်သို့အကျိုးသက်ရောက်သည်ကို နားလည်ခြင်းသည် ကုသမှုများ တီထွင်ရာတွင် အရေးကြီးပါသည်။ ကျန်းမာသောဆဲလ်များနှင့် ရောဂါရှိသောဆဲလ်များမှ အင်္ဂါအစိတ်အပိုင်းများကို နှိုင်းယှဉ်ရန်အတွက် ကွဲပြားသော ဗဟိုခွာစက်ကို အသုံးပြုနိုင်ပြီး ရောဂါယန္တရားများနှင့် အလားအလာရှိသော ကုထုံးပစ်မှတ်များအကြောင်း ထိုးထွင်းသိမြင်မှုများကို ပေးစွမ်းနိုင်ပါသည်။
၃။ ဆဲလ်ဖွံ့ဖြိုးမှုကို စုံစမ်းစစ်ဆေးခြင်း
သန္ဓေတည်ခြင်း သို့မဟုတ် တစ်ရှူးကွဲပြားခြင်းအတွင်း၊ အင်္ဂါအစိတ်အပိုင်းများ၏ စီစဉ်ဖွဲ့စည်းမှုနှင့် ပါဝင်ပစ္စည်းများ ပြောင်းလဲသွားသည်။ ကွဲပြားသော ဗဟိုခွာစနစ်သည် သုတေသီများအား ဤပြောင်းလဲနေသော ပြောင်းလဲမှုများကို စစ်ဆေးနိုင်စေပြီး ဆဲလ်ဖွံ့ဖြိုးမှုနှင့် ကွဲပြားခြင်းတွင် ပါဝင်သော ရှုပ်ထွေးသော လုပ်ငန်းစဉ်များကို ဖြေရှင်းနိုင်စေပါသည်။
၄။ ဇီဝအမှတ်အသားများကို ဖော်ထုတ်ခြင်း
ပရိုတီယိုမစ်ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုနှင့် ပေါင်းစပ်ထားသော ဒစ်ဖ্যান্যান্য စင်ထရီဖူဂရှင်းသည် ရောဂါအမျိုးမျိုးနှင့် ဆက်စပ်နေသော ဇီဝအမှတ်အသားများကို ဖော်ထုတ်ရန်အတွက် အဖိုးမဖြတ်နိုင်သောကိရိယာတစ်ခုဖြစ်သည်။ အင်္ဂါအစိတ်အပိုင်းများကို လေ့လာခြင်းဖြင့် သုတေသီများသည် ရောဂါအခြေအနေများတွင် တိကျစွာတည်ရှိနေသော သို့မဟုတ် ပြောင်းလဲနေသော ပရိုတိန်းများကို ရှာဖွေတွေ့ရှိနိုင်ပြီး အစောပိုင်းရောဂါရှာဖွေခြင်းနှင့် ကုသမှုစောင့်ကြည့်ခြင်းကို အထောက်အကူပြုပါသည်။
၅။ ဆေးဝါးပို့ဆောင်ရေးစနစ်များ
ဆေးဝါးပို့ဆောင်ရေးနယ်ပယ်တွင် ဆေးဝါးသယ်ဆောင်သူများသည် မတူညီသော အင်္ဂါအစိတ်အပိုင်းများနှင့် မည်သို့အပြန်အလှန် ဆက်သွယ်မှုရှိသည်ကို နားလည်ခြင်းသည် အရေးကြီးပါသည်။ မတူညီသော ဗဟိုခွာစနစ်ဖြင့် ပစ်မှတ်အင်္ဂါအစိတ်အပိုင်းများကို ခွဲထုတ်နိုင်စေပြီး ဆေးဝါးတည်နေရာအလိုက် တည်ရှိမှု၊ ထုတ်လွှတ်မှုယန္တရားများနှင့် အဆိပ်အတောက်ဖြစ်စေနိုင်သော စိုးရိမ်မှုများကို ထိုးထွင်းသိမြင်စေပါသည်။
နိဂုံးချုပ်
ဒစ်ဖ্যান ...
။