Sgaradh subcellular: A’ faighinn thairis air an dùbhlan mu bhith a’ sgaradh niùclas agus mitochondria
Ro-ràdh:
Tha centrifugation na innleachd chumhachdach a thathar a’ cleachdadh ann am bith-eòlas ceallach is moileciuil gus diofar organelles a sgaradh agus a sgaradh bho mheasgachadh heterogeneous. Tha am pròiseas stèidhichte air prionnsapal grùid eadar-dhealaichte, far a bheil na h-organelles nas truime a’ socrachadh aig bonn tiùb fo fheachd ceud-ghluasadach. Ach, tha beagan eisgeachdan ann don riaghailt seo, agus is e nuclei agus mitochondria dà organelles nach bi a ’sgaradh gu furasta le centrifugation. San artaigil seo, nì sinn sgrùdadh air na dùbhlain a tha an lùib a bhith a’ sgaradh an dà organelles deatamach sin, cho cudromach sa tha an co-ghlanadh ann an cuid de dheuchainnean, agus dòighean eile gus faighinn thairis air a’ chnap-starra seo.
1. Iom-fhillteachd Nuclei agus Mitochondria:
Tha e an urra ri nuclei, ris an canar gu tric mar ionad stiùiridh na cealla, a bhith a’ cumail stuth ginteil agus a’ riaghladh faireachdainn gine. Tha Mitochondria, air an làimh eile, nan taighean-cumhachd deatamach a ghineas lùth ann an cruth adenosine triphosphate (ATP). Air sgàth an dreuchdan sònraichte agus na feartan structarail sònraichte aca, faodaidh sgaradh an dà organelles seo a bhith na dhùbhlan mòr.
2. Cudromachd Co-purification:
Ged a dh’ fhaodadh gum biodh e ion-mhiannaichte organelles fa leth a ghlanadh airson deuchainnean sònraichte, tha cùisean ann far a bheil co-ghlanadh nèimheasan agus mitochondria air leth cudromach. Mar eisimpleir, nuair a bhios tu a’ sgrùdadh riaghladh abairt gine mar fhreagairt air atharrachaidhean ann am metabolism mitochondrial, bidh e deatamach mion-sgrùdadh a dhèanamh air buaidh eas-òrdugh mitochondrial air faireachdainn gine niùclasach. Ann an leithid de shuidheachaidhean, dh’ adhbhraicheadh sgaradh niuclas bho mitochondria gu mion-sgrùdadh neo-choileanta agus mìneachaidhean mearachdach.
3. Crìochan Centrifugation gnàthach:
Bidh dòighean centrifugation traidiseanta a’ cleachdadh centrifugation eadar-dhealaichte, a tha a’ toirt a-steach sreath de cheumannan centrifugation aig diofar astaran gus organelles a sgaradh a rèir meud agus dùmhlachd. Gu mì-fhortanach, tha dùmhlachd thar-tharraingeach aig niuclasan agus mitochondria agus feartan grùid co-chosmhail, ga fhàgail cha mhòr do-dhèanta an sgaradh leis an dòigh-obrach seo a-mhàin. Tha seo gu sònraichte mar thoradh air an ìre àrd de lipid anns an dà organelles, a’ leantainn gu an aon spionnadh agus a’ leantainn gu co-ghrùid aig àm centrifugation.
4. Dòighean Eile airson Iomallach:
Gus faighinn thairis air crìochan centrifugation, tha luchd-rannsachaidh air dòighean eile a leasachadh airson sgaradh nèimhean agus mitochondria. Is e aon dòigh den leithid centrifugation caisead dùmhlachd, a bhios a’ cleachdadh meadhan caisead dùmhlachd gus caisead leantainneach a chruthachadh. Le bhith a’ laigheachadh an homogenate gu faiceallach air mullach an caisead agus ga centrifuging, faodaidh organelles a bhith air am bloigh a rèir am neart, a’ ceadachadh sgaradh gu ìre mhath èifeachdach de niùclas agus mitochondria. Ach, a dh’ aindeoin an dealachadh leasaichte, dh’ fhaodadh gun toir an dòigh seo nas fhaide agus tha e nas dùbhlanaiche a choileanadh.
5. Dòighean adhartach: grìogagan magnetach agus tagadh flùraiseach:
Anns na beagan bhliadhnaichean a dh ’fhalbh, tha dòighean adhartach a’ toirt a-steach grìogagan magnetach agus tagadh flùraiseach air fàs mòr-chòrdte airson dealachadh subcellular. Faodar grìogagan magnetach còmhdaichte le antibodies sònraichte a tha ag amas air pròtanan uachdar a tha an làthair air niùclas no mitochondria a chleachdadh gus aon organelle a sgaradh bhon fhear eile. A bharrachd air an sin, le bhith a’ cleachdadh dathan flùraiseach sònraichte a tha ag amas air nuclei no mitochondria, faodar organelles a sheòrsachadh a’ cleachdadh cytometers sruthadh sònraichte no innealan seòrsachaidh cealla air a ghnìomhachadh le fluorescence (FACS). Tha na teicneòlasan ùr-nodha sin a’ tabhann cruinneas agus èifeachdas nach fhacas a-riamh ann an aonaranachd nan organelles sin.
Co-dhùnadh:
Tha e na dhùbhlan a bhith a’ sgaradh niuclasan agus mitochondria air sgàth an aon dùmhlachd agus nàdar beairteach lipid. Fhad ‘s a tha dòighean traidiseanta centrifugation a’ strì ri dealachadh iomchaidh a choileanadh, tha dòighean adhartach leithid centrifugation caisead dùmhlachd, aonaranachd stèidhichte air grìogagan magnetach, agus tagadh flùraiseach air nochdadh mar innealan cumhachdach airson faighinn thairis air na cnapan-starra sin. Chan e a-mhàin gu bheil na dòighean ùr-ghnàthach sin a’ leasachadh èifeachdas agus neo-mhearachdachd sgaradh organelle ach bidh iad cuideachd a’ comasachadh mion-sgrùdadh coileanta air na gnìomhan agus an eadar-obrachadh aca, a’ fosgladh slighean ùra airson rannsachadh ceallach is moileciuil.
.