Astar centrifuge gus ribosomes an-asgaidh a sgaradh: dòigh riatanach airson sgrùdadh bith-eòlas moileciuil
Ro-ràdh:
Tha pàirt deatamach aig ribosomes an-asgaidh ann an synthesis pròtain, agus tha an dealachadh bho cho-phàirtean cealla eile na obair bhunaiteach ann an rannsachadh bith-eòlas moileciuil. Tha an artaigil seo a’ sgrùdadh cho cudromach sa tha astar centrifuge ann a bhith a’ sgaradh ribosomes an-asgaidh agus a’ soilleireachadh na diofar phròtacalan agus bheachdachaidhean airson a’ phròiseis seo.
I. A' Tuigsinn Ribosomes Saor:
Gus tuigse fhaighinn air cho cudromach sa tha astar centrifuge ann a bhith a’ dealachadh ribosomes an-asgaidh, tha e riatanach tuigsinn nàdar agus gnìomhan nan co-phàirtean ceallach sin. Is e structaran beaga gràineach a th’ ann an ribosomes an-asgaidh a lorgar a’ seòladh gu saor anns an cytoplasm, le uallach airson synthesis phròtainean taobh a-staigh na cealla. Chan eil structar ceangailte ri membran aca, gan comharrachadh bho na ribosomes a tha ceangailte ris an reticulum endoplasmic. Tha iomallachd ribosomes an-asgaidh a’ toirt cothrom dhuinn tuigse nas doimhne fhaighinn air na dreuchdan deatamach aca ann an cinneasachadh pròtain ceallach.
II. Prionnsabalan Centrifugation:
Tha Centrifugation na dhòigh air a chleachdadh gu farsaing gus diofar phàirtean cealla a sgaradh a rèir am meud, an dùmhlachd agus an cuideam moileciuil. Tha e a’ toirt a-steach cleachdadh feachd ceud-ghluasadach, air a chruthachadh le bhith a’ snìomh shampaill aig astaran àrd, gus sprùilleach cealla, organelles, agus macromolecules a sgaradh. Gus iomallachd ribosomes an-asgaidh a choileanadh, tha e deatamach astar agus fad centrifuge a bharrachadh, leis gu bheil na factaran sin a’ toirt buaidh mhòr air èifeachdas dealachaidh.
III. Optimization astar Centrifuge:
A. A’ sgrùdadh raointean astair:
Tha a bhith a’ dearbhadh an astar centrifuge iomchaidh airson a bhith a’ sgaradh ribosomes an-asgaidh an urra ri grunn nithean, a’ gabhail a-steach an seòrsa sampall agus an ìre purrachd a tha thu ag iarraidh. San fharsaingeachd, bidh luchd-rannsachaidh ag obair taobh a-staigh raon farsaing de astaran, a’ tòiseachadh bho astaran ìosal gus sprùilleach cealla nas motha a ghlanadh agus a’ meudachadh mean air mhean. Mar as trice bidh an raon astair as fheàrr a’ tuiteam eadar 10,000 gu 100,000 x g, le atharrachaidhean stèidhichte air feartan sampall sònraichte.
B. Eisimpleirean de fheartan:
Tha diofar ìrean de pailteas ribosome aig ceallan agus figheagan eadar-dhealaichte. Mar eisimpleir, mar as trice bidh barrachd ribosomes ann am figheagan le ìre metabollach nas àirde, leithid ceallan fèithe no grùthan. Feumar an astar centrifuge atharrachadh a rèir sin gus an èifeachdas dealachaidh a tha thu ag iarraidh fhaighinn.
IV. Pròtacalan Centrifugation airson Iomallach Ribosome an-asgaidh:
A. Eisimpleir ullachadh:
Gus ribosomes an-asgaidh a sgaradh gu soirbheachail, tha ullachadh sampall ceart deatamach. Feumar dòighean lysis cealla, leithid sonication no aimhreit cealla a’ cleachdadh innealan-glanaidh, a chuir an sàs gus ceallan fosgailte a bhriseadh agus an susbaint a leigeil ma sgaoil. Às deidh sin, thèid na sampallan lysed tro shreath de cheumannan centrifugation airson toirt air falbh sprùilleach, a’ toirt a-mach supernatant soilleir anns a bheil ribosomes.
B. Centrifugation eadar-dhealaichte:
Tha centrifugation diofraichte, dòigh air a chleachdadh gu cumanta, a’ toirt a-steach grunn shnìomh sreathach aig astaran centrifuge a tha ag àrdachadh. Tha an dòigh seo a’ leigeil le luchd-rannsachaidh ribosomes a sgaradh bho cho-phàirtean cealla eile gu h-èifeachdach. Bidh spins aig astar ìosal tùsail a’ toirt air falbh sprùilleach cealla, agus an uairsin astaran eadar-mheadhanach gus organelles agus pròtanan cealla nas motha a sgaradh. Mu dheireadh, thathas a’ cleachdadh snìomhan àrd-astar gus am bloigh a tha thu ag iarraidh fhaighinn a tha beairteach ann an ribosomes an-asgaidh.
C. Centrifugation caisead:
Bidh centrifugation caisead a’ cleachdadh meadhanan caisead dùmhlachd, leithid sucrose no cesium chloride, gus ribosomes a sgaradh a rèir an dùmhlachd làidir. Le bhith a’ cur an sampall air caisead dùmhlachd agus centrifuging aig astar fo smachd, faodar ribosomes a sgaradh le barrachd rùn. Tha an dòigh seo a’ tabhann purrachd nas fheàrr agus a’ ceadachadh diofar fo-chlasaichean ribosome a sgaradh a rèir na h-ìrean grùid aca.
V. Factaran a bheir buaidh air Optimization Astar Centrifuge:
A. Sample Volume:
Bheir meud an t-sampall buaidh mhòr air optimization astar centrifuge. Dh’ fhaodadh gum bi feum aig meudan sampall nas motha air amannan centrifugation nas fhaide no astaran nas àirde gus dèanamh cinnteach à dealachadh iomchaidh. Ach, tha e deatamach a bhith mothachail gum faodadh cus astar no amannan centrifugation fada leantainn gu milleadh ribosome agus buaidh a thoirt air deuchainnean às deidh sin.
B. Seòrsa Rotor:
Tha crìochan astair eadar-dhealaichte aig diofar rotors centrifuge agus na comasan rotor as àirde a thathar a’ moladh. Tha e deatamach rotor iomchaidh a thaghadh gus milleadh uidheamachd a sheachnadh agus dealachadh ceart a chumail suas. Tha e riatanach co-chomhairle a chumail ri leabhar-làimhe neach-cleachdaidh an centrifuge agus molaidhean an neach-dèanamh nuair a thaghas tu seòrsa rotor stèidhichte air an astar a tha thu ag iarraidh agus an tomhas sampall.
Co-dhùnadh:
Tha e deatamach gum bi an astar centrifuge as fheàrr airson sgaradh soirbheachail de ribosomes an-asgaidh, a’ comasachadh sgrùdadh a dhèanamh air an àite aca ann an synthesis pròtain ceallach. Le bhith a’ leantainn phròtacalan sònraichte agus a’ beachdachadh air feartan sampall, faodaidh luchd-rannsachaidh ribosomes an-asgaidh a sgaradh gu h-èifeachdach, a’ toirt seachad seallaidhean luachmhor air na gnìomhan agus an eadar-obrachadh taobh a-staigh na h-àrainneachd cealla.
.