Ro-ràdh do Lysosomes agus Peroxisomes
Tha lysosomes agus peroxisomes nan dà organelles cealla fa leth le gnìomhan sònraichte aig a bheil prìomh dhleastanasan ann am metabolism cealla agus homeostasis. Tha lysosomes nan organelles ceangailte ri membran air an lìonadh le enzyman cnàmhaidh le uallach airson a bhith a’ briseadh sìos stuthan sgudail cealla, mìrean cèin, agus pathogens. Tha peroxisomes, air an làimh eile, an sàs ann an diofar ath-bhualaidhean metabollach, gu sònraichte an fheadhainn co-cheangailte ri detoxification agus metabolism lipid. Gus sgrùdadh a dhèanamh air na h-organelles sin air leth, is e aon dhòigh air a chleachdadh gu cumanta centrifugation. San artaigil seo, nì sinn sgrùdadh air mar as urrainnear centrifugation a chleachdadh gus lysosomes a sgaradh bho peroxisomes gu soirbheachail.
Prionnsabalan agus dòighean-obrach centrifugation
Is e dòigh chumhachdach a th’ ann an centrifugation a thathas a’ cleachdadh gus diofar phàirtean de mheasgachadh heterogeneous a sgaradh a rèir am meud, dùmhlachd agus cumadh. Bidh e ag obair air prionnsapalan grùid, far am bi gràineanan nas truime a’ socrachadh nas luaithe fo bhuaidh feachd ceud-ghluasadach. Gus lysosomes a sgaradh bho peroxisomes, faodar diofar dhòighean centrifugation a chleachdadh, leithid centrifugation diofraichte agus centrifugation caisead dùmhlachd.
Centrifugation diofraichte: toirt a-mach lysosomes agus peroxisomes
Tha centrifugation eadar-dhealaichte a’ toirt a-steach sreath de cheumannan centrifugation aig diofar astaran agus amannan gus organelles a sgaradh a rèir an dùmhlachd. Seo mar a ghabhas a chleachdadh airson lysosomes agus peroxisomes a thoirt a-mach:
Ceum 1: Homogenization
Is e a’ chiad cheum na ceallan a bhriseadh gu socair agus an susbaint a leigeil ma sgaoil a ’cleachdadh dòigh homogenization. Faodar seo a choileanadh le sonicating no a 'cleachdadh speisealta homogenizer. Canar homogenate ris a’ mheasgachadh a thig às.
Ceum 2: Centrifugation aig astar ìosal
Tha an homogenate an uairsin fo ùmhlachd centrifugation aig astar ìosal (timcheall air 1,000-2,000 x g) airson ùine ghoirid. Bidh an ceum seo a’ cuideachadh le bhith a’ sgaradh sprùilleach cealla nas motha agus am bloigh niùclasach bhon chòrr de na h-organelles a tha an làthair anns an homogenate.
Ceum 3: Centrifugation aig astar meadhanach
Tha an supernatant a gheibhear bhon cheum centrifugation aig astar ìosal fo ùmhlachd centrifugation aig astar meadhanach (timcheall air 10,000 x g) gu organelles trom grùid leithid lysosomes agus peroxisomes. Mar thoradh air a’ cheum seo bidh peilear anns a bheil na h-organelles sin.
Ceum 4: Nigh agus ath-chuiridh
Tha am pellet a gheibhear sa cheum roimhe air a nighe le fuasgladh bufair iomchaidh agus an uairsin ath-chuiridh gus bloigh lysosome agus peroxisome ghlan fhaighinn.
Centrifugation caisead dùmhlachd: ag ùrachadh an dealachaidh
Tha centrifugation caisead dùmhlachd na dhòigh adhartach centrifugation a leigeas le tuilleadh glanadh agus ùrachadh air lysosomes agus peroxisomes. Anns an dòigh seo, tha caisead dùmhlachd air a chruthachadh le bhith a’ cleachdadh fuasgladh cruth caisead leithid sucrose no iodixanol. Seo mar a ghabhas a chuir an sàs:
Ceum 1: Ag ullachadh caisead dùmhlachd
Tha meadhan caisead dùmhlachd, leithid sucrose, air ullachadh ann an tiùb centrifuge, le dùmhlachd eadar-dhealaichte bho mhullach gu bonn no bonn gu mullach. Tha co-dhèanamh agus dùmhlachd a’ mheadhan caisead air an taghadh gu faiceallach, a’ dèanamh cinnteach gu bheil e nas aotroime na peroxisomes ach nas dùmhail na lysosomes.
Ceum 2: Layering of Sample
Tha am bloigh lysosome agus peroxisome ath-leasaichte a gheibhear bho centrifugation diofraichte air a chòmhdach gu faiceallach a bharrachd air meadhan caisead dùmhlachd.
Ceum 3: Centrifugation
Bidh an tiùb an uairsin fo smachd centrifugation aig astar àrd (ultracentrifugation) gus lysosomes agus peroxisomes a sgaradh stèidhichte air an dùmhlachd làidir. Rè centrifugation, bidh na h-organelles a 'gluasad tron mheadhan gus an ruig iad sgìre far a bheil an dùmhlachd beothail aca a' freagairt ri dùmhlachd a 'mheadhan mun cuairt, a' cruthachadh bannan sònraichte.
Mion-sgrùdadh agus Iarrtasan a bharrachd
Às deidh dealachadh soirbheachail, faodar na bloighean lysosome agus peroxisome a gheibhear a sgrùdadh tuilleadh le bhith a’ cleachdadh diofar dhòighean gus an purrachd, am meud, an sgrìobhadh agus na feartan gnìomh a mheasadh. Faodaidh dòighean leithid microscopy dealanach, immunocytochemistry, agus measaidhean gnìomhachd enzyme seallaidhean luachmhor a thoirt seachad air na bloighean iomallach, a’ dearbhadh an dearbh-aithne agus an purrachd.
A bharrachd air adhbharan rannsachaidh, tha an comas air lysosomes agus peroxisomes a sgaradh tro centrifugation air a chleachdadh ann an breithneachadh meidigeach, leasachadh dhrogaichean, agus eadar-theachdan leigheasach. Le bhith a’ tuigsinn nas fheàrr gnìomhan nan organelles sin, faodaidh luchd-saidheans sgrùdadh a dhèanamh air ro-innleachdan teirpeach ùra a tha ag amas air eas-òrdughan lysosomal no peroxisomal, leithid galairean stòraidh lysosomal no eas-òrdughan biogenesis peroxisome.
Ann an co-dhùnadh, tha dealachadh lysosomes bho peroxisomes a’ cleachdadh dòighean centrifugation, leithid centrifugation diofraichte agus centrifugation caisead dùmhlachd, na dhòigh-obrach riatanach ann an rannsachadh bith-eòlas cealla. Tha na dòighean sin a’ toirt comas do luchd-saidheans bloighean fìor-ghlan de lysosomes agus peroxisomes fhaighinn, a’ cuideachadh le bhith a’ tuigsinn an dreuchdan fa-leth, slighean metabollach, agus eadar-theachdan teirpeach a dh’fhaodadh a bhith ann airson galairean co-cheangailte.
.