ciamar a tha eadar-dhealachadh centrifugation a 'sgaradh organelles

Centrifugation diofraichte: A’ fuasgladh dìomhaireachdan Organelles

Ro-ràdh

Tha centrifugation eadar-dhealaichte na dhòigh chumhachdach a thathar a’ cleachdadh ann an rannsachadh bith-eòlasach gus co-phàirtean cealla a sgaradh a rèir am meud agus an dùmhlachd. Tha pàirt chudromach aige ann a bhith a’ soilleireachadh gnìomhan agus eadar-obrachadh diofar organelles taobh a-staigh cheallan. Le bhith a’ cur homogenates cealla fo smachd sreath de cheumannan ceud-ghluasadach sreathach aig diofar astaran, faodaidh luchd-saidheans organelles a bhriseadh agus a sgaradh gu h-èifeachdach, a’ fuasgladh na slighe airson mion-sgrùdadh. San artaigil seo, nì sinn sgrùdadh air prionnsapalan, dòighean, agus cleachdadh centrifugation eadar-dhealaichte, a’ tilgeil solas air mar a bheir e comas do sgaradh agus sgrùdadh organelles.

I. Prionnsabal an Eadar-dhealachaidh Centrifugation

Bidh centrifugation eadar-dhealaichte a’ gabhail brath air na h-eadar-dhealachaidhean ann am meud, cumadh, agus dùmhlachd am measg cho-phàirtean ceallach gus an dealachadh. Le bhith a’ cleachdadh feachdan centrifugal, faodar na co-phàirtean a bhith air am bloigh a rèir na h-ìrean grùid aca. Tha am modh-obrach a’ toirt a-steach grunn cheumannan centrifugation aig astaran mean air mhean nas àirde, a’ ceadachadh iomallachd mean air mhean air organelles sònraichte.

II. A 'stèidheachadh Pròtacal Centrifugation Eadar-dhealaichte

Gus centrifugation eadar-dhealaichte a dhèanamh gu h-èifeachdach, feumaidh luchd-rannsachaidh protocol a dhealbhadh gu faiceallach a nì an ìre as fheàrr de sgaradh organelles. Tha seo a’ ciallachadh a bhith a’ taghadh astar, fad, teòthachd agus meadhan iomchaidh. A bharrachd air an sin, tha e deatamach gun tèid bufairean ceart a chleachdadh agus dèanamh cinnteach à co-sheòrsachd sampall gus caochlaideachd deuchainneach a sheachnadh.

III. Ceumannan Centrifugation eadar-dhealaichte

1. Ceum 1: Homogenization

Is e a’ chiad cheum ann an centrifugation eadar-dhealaichte homogenization, far am bi ceallan no maothran air am briseadh gus na co-phàirtean aca a leigeil ma sgaoil. Mar as trice tha seo air a choileanadh tro dhòighean meacanaigeach, leithid bleith no sonication, gus crochaidh cealla no homogenate a chruthachadh.

2. Ceum 2: Ìosal-Speed ​​Centrifugation

Tha an homogenate fo smachd ceum centrifugation aig astar ìosal gus an sprùilleach cealla agus na ceallan gun bhriseadh a thoirt air falbh. Bidh centrifugation aig timcheall air 1,000 gu 2,000 × g airson ùine ghoirid ag adhbhrachadh gum bi an stuth nas truime a’ peileadh, a’ fàgail supernatant beairteach le organelles slàn.

3. Ceum 3: Differential Centrifugation

Thèid an supernatant a gheibhear bhon cheum centrifugation aig astar ìosal a ghluasad gu tiùb ùr às deidh sin agus bidh e fo smachd centrifugation aig astar nas àirde. Tha an ceum seo ag amas air na h-organelles a sgaradh a rèir an dùmhlachd. Bidh mitochondria, mar eisimpleir, mar as trice a’ peileadh aig astaran eadar 6,000 agus 10,000 × g, fhad ‘s a bhios organelles eile a’ fuireach anns an supernatant.

4. Ceum 4: Tuilleadh Fractionation

Gus organelles sònraichte a sgaradh no roinnean subcellular fhuasgladh, faodar cuairt eile de centrifugation eadar-dhealaichte a dhèanamh. Tha seo a’ ciallachadh a bhith a’ toirt an supernatant bhon cheum roimhe agus ga chuir fo fheachd ceud-ghluasadach eadhon nas àirde. Le bhith a’ gleusadh an astair agus an fhad, faodaidh luchd-rannsachaidh organelles sònraichte a shaidhbhreachadh agus truailleadh a lughdachadh.

5. Ceum 5: Purification agus Mion-sgrùdadh

Às deidh centrifugation eadar-dhealaichte, faodar na bloighean a tha beairteach le organelles sònraichte a ghlanadh tuilleadh le bhith a’ cleachdadh dhòighean a bharrachd leithid centrifugation caisead dùmhlachd no immunoprecipitation. Mu dheireadh, faodar na h-organelles iomallach a chomharrachadh gu mionaideach le bhith a’ cleachdadh microscopy, proteomics, genomics, no dòighean sònraichte eile.

IV. Cleachdaidhean eadar-dhealachaidh Centrifugation

Tha centrifugation eadar-dhealaichte na dhòigh clach-oisinn ann an diofar raointean de shaidheansan beatha. Tha na tagraidhean aige farsaing, bho sgrùdadh cealla bunaiteach gu sgrùdaidhean breithneachaidh agus leigheasach. Seo beagan thagraidhean sònraichte:

1. Rannsachadh Gnìomhan Organelle

Tha centrifugation eadar-dhealaichte a’ leigeil le luchd-rannsachaidh organelles fìor-ghlan fhaighinn, a’ cuideachadh le bhith a’ comharrachadh an gnìomhan eòlas-inntinn. Le bhith a’ sgrùdadh organelles iomallach, faodaidh luchd-saidheans na dreuchdan aca ann am pròiseasan leithid metabolism, synthesis pròtain, cinneasachadh lùtha, agus homeostasis cealla a mhìneachadh.

2. A' Rannsachadh Innealan Galar

Tha tuigse air mar a bheir galairean buaidh air structar agus gnìomh organelle deatamach airson làimhseachadh a leasachadh. Faodar centrifugation eadar-dhealaichte a chleachdadh gus coimeas a dhèanamh eadar organelles bho cheallan fallain agus galair, a’ toirt seachad sealladh air dòighean galair agus targaidean teirpeach a dh’fhaodadh a bhith ann.

3. Rannsachadh Cellular Leasachadh

Rè embryogenesis no eadar-dhealachadh clò, bidh eagrachadh agus sgrìobhadh organelles ag atharrachadh. Leigidh centrifugation diofraichte le luchd-rannsachaidh sgrùdadh a dhèanamh air na h-atharrachaidhean fiùghantach sin, a’ fuasgladh nam pròiseasan toinnte a tha an lùib leasachadh cealla agus eadar-dhealachadh.

4. A 'comharrachadh Biomarkers

Tha centrifugation eadar-dhealaichte còmhla ri mion-sgrùdadh proteomic na inneal luachmhor airson a bhith a’ comharrachadh bith-chomharran co-cheangailte ri diofar ghalaran. Le bhith a’ sgrùdadh organelles, faodaidh luchd-rannsachaidh lorg fhaighinn air pròtanan a tha gu sònraichte ionadail no air an atharrachadh ann an suidheachaidhean galair, a’ cuideachadh le breithneachadh tràth agus sgrùdadh làimhseachaidh.

5. Siostaman Lìbhrigeadh Dhrugaichean

Ann an raon lìbhrigeadh dhrogaichean, tha e riatanach tuigsinn mar a bhios luchd-giùlan dhrogaichean ag eadar-obrachadh le diofar organelles. Tha centrifugation eadar-dhealaichte a’ comasachadh organelles targaid a aonaranachd, a’ toirt seachad sealladh air sgìreachadh dhrogaichean, dòighean fuasglaidh, agus draghan puinnseanta a dh’fhaodadh a bhith ann.

Co-dhùnadh

Tha àite cudromach aig centrifugation eadar-dhealaichte ann a bhith a’ sgaradh organelles, a’ leigeil le luchd-rannsachaidh na gnìomhan, na feartan agus na dreuchdan aca ann am pròiseasan cealla fhuasgladh. Le bhith a’ dealbhadh phròtacalan gu faiceallach agus a’ cleachdadh ceumannan centrifugation sreath, faodaidh luchd-saidheans na sampallan aca a shaidhbhreachadh airson organelles sònraichte, a’ comasachadh tuilleadh sgrùdaidh agus sgrùdadh air na pàirtean cealla deatamach sin. Mar a bhios teicneòlas a’ leantainn air adhart a’ dol air adhart, chan eil teagamh nach bi centrifugation eadar-dhealaichte fhathast na innleachd clach-oisinn ann am bith-eòlas cealla, a’ comasachadh tuilleadh lorgan agus adhartasan ann an diofar raointean rannsachaidh.