የእኛ የAllweys AI አቅርቦት ባልተለመደ ቅልጥፍና AI ቁጥጥርን ይመካል።
ቋንቋ
የእኛ የAllweys AI አቅርቦት ባልተለመደ ቅልጥፍና AI ቁጥጥርን ይመካል።
ሴንትሪፉጅ ዲ ኤን ኤ ከፕሮቲን ይለያል?
መግቢያ
ሴንትሪፉግሽን በሳይንሳዊ ምርምር እና ክሊኒካዊ ላቦራቶሪዎች ውስጥ የናሙናውን የተለያዩ ክፍሎች በክብደታቸው ላይ በመመስረት ለመለየት በሰፊው ጥቅም ላይ የሚውል ወሳኝ ዘዴ ነው። የዚህ ዘዴ አንድ የተለመደ አተገባበር ዲ ኤን ኤ እና ፕሮቲኖችን ከሥነ ህይወታዊ ናሙና ማግለልን ያካትታል። በዚህ ጽሑፍ ውስጥ፣ ሴንትሪፉጅ ዲ ኤን ኤውን ከፕሮቲኖች የመለየት ብቃት እንዳለው እና ቀልጣፋ መለያየትን ለማግኘት ወደተቀጠሩት የተለያዩ ዘዴዎች ውስጥ በጥልቀት እንመረምራለን።
ሴንትሪፍግሽን መረዳት
ሴንትሪፉጅ በመጠቀም ዲ ኤን ኤውን ከፕሮቲኖች የመለየት ልዩ ሁኔታዎችን ከመፈተሽ በፊት፣ የሴንትሪፉጅሽን መሰረታዊ መርሆችን መረዳት ያስፈልጋል። አንድ ሴንትሪፉጅ በደለል መርህ ላይ ይሰራል እና ጠንካራ ሴንትሪፉጋል ኃይል ለመፍጠር በከፍተኛ ፍጥነት ማሽከርከርን ይጠቀማል። ይህ ኃይል በናሙና ውስጥ ያሉ ቅንጣቶች በመጠንነታቸው ላይ ተመስርተው እንዲለያዩ ያደርጋል፣ ጥቅጥቅ ያሉ ቅንጣቶች ወደ ናሙና ቱቦው ግርጌ ይፈልሳሉ። በዚህ ምክንያት ቀለል ያሉ ቅንጣቶች ከላይ ይቀራሉ።
ዲ ኤን ኤ እና ፕሮቲኖችን የመለየት ፈተና
ዲ ኤን ኤ እና ፕሮቲኖችን መለያየትን በተመለከተ፣ ሁለቱም ሞለኪውሎች ተመሳሳይ ሞለኪውላዊ ክብደት ስላላቸው ፈታኝ ነው። ውጤታማ የመለያያ ዘዴ ከሌለ ንጹህ የዲ ኤን ኤ ወይም የፕሮቲን ናሙናዎችን ማግኘት አስቸጋሪ ነው. ነገር ግን፣ ሴንትሪፍጋሽን በመለያየት ሂደት ውስጥ ሊረዳ ይችላል፣ ግን በራሱ በቂ ላይሆን ይችላል።
1. ዲፈረንሻል ሴንትሪፍግሽን፡ የመጀመሪያ መለያየት
2. Ultracentrifugation: የተሻሻለ መለያየት
3. ጥግግት ግራዲየንት ሴንትሪፍግሽን፡ ሂደቱን ማጥራት
4. የመጠባበቂያ ምርጫ አስፈላጊነት
5. ሴንትሪፍግሽን ከሌሎች የመለያ ዘዴዎች ጋር
ልዩነት ሴንትሪፍግሽን፡ የመጀመሪያ መለያየት
ዲፈረንሻል ሴንትሪፍግሽን ዲ ኤን ኤውን ከፕሮቲኖች ለመለየት የመጀመሪያው እርምጃ ነው። ይህ ዘዴ የሴሉላር ክፍሎችን ሰፊ መለያየት ለማግኘት የተለያዩ የሴንትሪፍግሽን ፍጥነቶችን ይጠቀማል. በዚህ ሂደት ውስጥ ግብረ-ሰዶማውያን ሴሎች ወይም ቲሹ ናሙናዎች ዝቅተኛ ፍጥነት ያለው ሴንትሪፍግሽን ይደረግባቸዋል፣ በተለይም በደቂቃ ከ1000-5000 አብዮት (ደቂቃ)። ይህ ዝቅተኛ ፍጥነት ያለው እሽክርክሪት ኒውክሊየስ እና ያልተነኩ ሴሎችን ለመለየት ያስችላል, ይህም ወደ ድፍድፍ ክፍልፋይ ይመራል. ይሁን እንጂ የዲ ኤን ኤ እና ፕሮቲኖችን ሙሉ በሙሉ መለየት አይሰጥም.
Ultracentrifugation: የተሻሻለ መለያየት
የልዩነት ሴንትሪፍግሽን ውሱንነት ለማሸነፍ፣ ultracentrifugation ወደ ቦታው ይገባል። Ultracentrifuges እስከ 100,000 ራምፒኤም ፍጥነት መድረስ የሚችሉ ባለከፍተኛ ፍጥነት ሴንትሪፉጅ ናቸው። ከመጀመሪያው ዝቅተኛ-ፍጥነት ሴንትሪፍግግግግግግግግግግግግግግግግግግግግግግግግግግግግግግግግግግግግግግግግግሉ ያለውን ድፍድፍ ክፍልፋዮች በማድረግ, በዲ ኤን ኤ እና ፕሮቲኖች መካከል ያለውን መለያየት ከፍተኛ ደረጃ ማግኘት ይቻላል. ከባዱ የዲኤንኤ ሞለኪውሎች ወደ ቱቦው ግርጌ ደለል፣ የሚታይ እንክብልና ይፈጥራል፣ ፕሮቲኖች ደግሞ በሱፐርናታንት ውስጥ ይቀራሉ።
ጥግግት ግራዲየንት ሴንትሪፍግሽን፡ ሂደቱን ማጥራት
የዲኤንኤ እና ፕሮቲኖችን መለያየት የበለጠ ለማጣራት፣ density gradient centrifugation ስራ ላይ ይውላል። በዚህ ቴክኒክ ውስጥ እንደ ሱክሮስ ወይም ሲሲየም ክሎራይድ ያለ ጥግግት ቅልመት መካከለኛ ይዘጋጃል። ይህ መካከለኛ የሴንትሪፉጅ ቱቦን ከላይ ወደ ታች በመጨመር የተለያዩ እፍጋቶችን ያካትታል. ከቀደመው ደረጃ የተገኘው የድፍድፍ ክፍልፋዮች በጥቅል ቅልጥፍናው ላይ በጥንቃቄ ተደራርበው እንደገና ወደ ultracentrifugation ተደርገዋል። ዲ ኤን ኤ እና ፕሮቲኖች በመጠንነታቸው ላይ ተመስርተው ይለያያሉ እና በግራዲየንቱ ውስጥ የተለያዩ ባንዶች ይፈጥራሉ። የግራዲየንት ክፍልፋይ የንፁህ ዲ ኤን ኤ እና የፕሮቲን ናሙናዎችን መልሶ ማግኘት ያስችላል።
የቋት ምርጫ አስፈላጊነት
በሴንትሪፍግሽን ጊዜ ጥቅም ላይ የሚውለው ቋት ቀልጣፋ መለያየትን ለማምጣት ወሳኝ ሚና ይጫወታል። ተለያይተው የሚገኙትን ሞለኪውሎች መረጋጋት እና ታማኝነት ይነካል. ለዲኤንኤ፣ የTris-EDTA ፒኤች 8.0 ያለው የዲኤንኤ መረጋጋትን የመጠበቅ ችሎታ ስላለው በተለምዶ ጥቅም ላይ ይውላል። በሌላ በኩል፣ ፕሮቲኖች ጥርስን ለመከላከል እና የትውልድ አወቃቀራቸውን ለመጠበቅ የተወሰኑ የፒኤች መጠን ያላቸው፣ አብዛኛውን ጊዜ 7.0 አካባቢ ያሉ መከላከያዎችን ይፈልጋሉ። ተገቢውን ቋት መምረጥ የዲ ኤን ኤ እና ፕሮቲኖችን ጥራታቸውን ሳይጎዳ በትክክል መለያየትን ያረጋግጣል።
ሴንትሪፉግ ከሌሎች የመለያየት ዘዴዎች ጋር
ሴንትሪፍጋሽን ዲ ኤን ኤውን ከፕሮቲኖች ለመለየት በሰፊው ጥቅም ላይ የዋለ ቴክኒክ ቢሆንም፣ ብቸኛው ጥቅም ላይ የዋለው ዘዴ ላይሆን እንደሚችል መቀበል አስፈላጊ ነው። እንደ ክሮማቶግራፊ፣ ኤሌክትሮፊዮሬሲስ እና ዝናብ ያሉ ሌሎች ቴክኒኮች ይበልጥ የተጣራ መለያየትን ለማግኘት ሴንትሪፍግሽንን ሊጨምሩ ይችላሉ። እያንዳንዱ ዘዴ የራሱ ጥቅሞች እና ገደቦች አሉት, እና ተመራማሪዎች ብዙውን ጊዜ የተፈለገውን የዲ ኤን ኤ እና ፕሮቲኖች ንፅህና እና ማገገም ብዙ ዘዴዎችን ያጣምራሉ.
መደምደሚያ
በማጠቃለያው ሴንትሪፉጅ ዲ ኤን ኤውን ከፕሮቲኖች ለመለየት ጠቃሚ ቢሆንም ከሌሎች ቴክኒኮች ጋር በጥምረት ይሰራል። ዲፈረንሻል ሴንትሪፍግሽን፣ ultracentrifugation እና density gradient centrifugation የተጣራ ናሙናዎችን ለማግኘት የሚያግዙ ተከታታይ የመለያያ ደረጃዎች ይመሰርታሉ። በተጨማሪም, ተገቢ ማቋረጫዎችን መምረጥ እና ሌሎች የመለያያ ዘዴዎችን ግምት ውስጥ ማስገባት የዲኤንኤ-ፕሮቲንን የመለየት አጠቃላይ ውጤታማነት የበለጠ ይጨምራል።
.