hoe om lisosome te skei van peroksisome sentrifugering

2023/08/17

Inleiding tot lisosome en peroksisome


Lysosome en peroksisome is twee afsonderlike selorganelle met afsonderlike funksies wat deurslaggewende rolle in sellulêre metabolisme en homeostase speel. Lysosome is membraangebonde organelle gevul met verteringsensieme wat verantwoordelik is vir die afbreek van sellulêre afvalmateriaal, vreemde deeltjies en patogene. Peroksisome, aan die ander kant, is betrokke by verskeie metaboliese reaksies, veral dié wat verband hou met ontgifting en lipiedmetabolisme. Om hierdie organelle afsonderlik te bestudeer, is een algemeen gebruikte metode sentrifugering. In hierdie artikel sal ons ondersoek hoe sentrifugering aangewend kan word om lisosome suksesvol van peroksisome te skei.


Sentrifugasiebeginsels en -tegnieke


Sentrifugering is 'n kragtige tegniek wat gebruik word om verskillende komponente van 'n heterogene mengsel te skei op grond van hul grootte, digtheid en vorm. Dit werk volgens die beginsels van sedimentasie, waar swaarder deeltjies vinniger afsak onder die invloed van sentrifugale krag. Om lisosome van peroksisome te skei, kan verskillende sentrifugeringtegnieke, soos differensiële sentrifugering en digtheidsgradiëntsentrifugering, aangewend word.


Differensiële sentrifugering: onttrekking van lisosome en peroksisome


Differensiële sentrifugering behels 'n reeks sentrifugeringstappe teen verskillende spoed en duur om organelle te skei op grond van hul digtheid. Hier is hoe dit gebruik kan word om lisosome en peroksisome te onttrek:


Stap 1: Homogenisering

Die eerste stap is om die selle sagkens te breek en hul inhoud vry te stel deur 'n homogeniseringstegniek te gebruik. Dit kan bereik word deur sonicating of die gebruik van 'n gespesialiseerde homogeniseerder. Die resulterende mengsel word na verwys as die homogenaat.


Stap 2: Laespoed sentrifugering

Die homogenaat word dan vir 'n kort tyd aan laespoed sentrifugering (ongeveer 1 000-2 000 x g) onderwerp. Hierdie stap help om groter selafval en die kernfraksie van die res van die organelle wat in die homogenaat teenwoordig is, te skei.


Stap 3: Medium-spoed sentrifugering

Die supernatant wat uit die laespoed sentrifugeringstap verkry word, word aan 'n mediumspoed sentrifugering (ongeveer 10 000 x g) onderwerp om swaar organelle soos lisosome en peroksisome te sedimenteer. Hierdie stap lei tot 'n korrel wat hierdie organelle bevat.


Stap 4: Was en hersuspendeer

Die korrel wat in die vorige stap verkry is, word met 'n geskikte gebufferde oplossing gewas en dan hersuspendeer om 'n gesuiwerde lisosoom- en peroksisoomfraksie te verkry.


Digtheidgradiëntsentrifugering: verfyn die skeiding


Digtheidsgradiëntsentrifugering is 'n gevorderde sentrifugeringtegniek wat verdere suiwering en verfyning van lisosome en peroksisome moontlik maak. In hierdie tegniek word 'n digtheidsgradiënt gevorm deur 'n gradiëntvormende oplossing soos sukrose of iodixanol te gebruik. Hier is hoe dit toegepas kan word:


Stap 1: Voorbereiding van digtheidsgradiënt

’n Digtheidsgradiëntmedium, soos sukrose, word in ’n sentrifugebuis voorberei, met wisselende digthede van bo na onder of onder na bo. Die samestelling en digtheid van die gradiëntmedium word sorgvuldig gekies, om te verseker dat dit ligter as peroksisome maar digter as lisosome is.


Stap 2: Lae van monster

Die hersuspendeerde lisosoom- en peroksisoomfraksie verkry uit differensiële sentrifugering word versigtig bo-op die digtheidsgradiëntmedium gelaag.


Stap 3: Sentrifugering

Die buis word dan onderwerp aan hoëspoed sentrifugering (ultrasentrifugering) om lisosome en peroksisome te skei op grond van hul dryfdigthede. Tydens sentrifugering beweeg die organelle deur die medium totdat hulle 'n gebied bereik waar hul dryfdigtheid ooreenstem met die digtheid van die omliggende medium, wat duidelike bande vorm.


Ontleding en verdere toepassings


Na suksesvolle skeiding kan die verkrygde lisosoom- en peroksisoomfraksies verder ontleed word deur verskeie tegnieke te gebruik om hul suiwerheid, grootte, samestelling en funksionele eienskappe te bepaal. Tegnieke soos elektronmikroskopie, immunositochemie en ensiemaktiwiteittoetse kan waardevolle insigte in die geïsoleerde fraksies verskaf, wat hul identiteit en suiwerheid bevestig.


Behalwe vir navorsingsdoeleindes, het die vermoë om lisosome en peroksisome deur middel van sentrifugering te skei toepassings in mediese diagnostiek, geneesmiddelontwikkeling en terapeutiese intervensies. Deur die funksies van hierdie organelle beter te verstaan, kan wetenskaplikes nuwe terapeutiese strategieë ondersoek wat lisosomale of peroksisomale afwykings teiken, soos lisosomale bergingsiektes of peroksisoombiogenese-afwykings.


Ten slotte, die skeiding van lisosome van peroksisome deur middel van sentrifugering tegnieke, soos differensiële sentrifugering en digtheidsgradiënt sentrifugering, is 'n noodsaaklike benadering in selbiologie navorsing. Hierdie tegnieke stel wetenskaplikes in staat om gesuiwerde fraksies van lisosome en peroksisome te verkry, wat help met die begrip van hul individuele rolle, metaboliese weë en potensiële terapeutiese intervensies vir verwante siektes.

.

KONTAK ONS
Sê net vir ons jou vereistes, ons kan meer doen as wat u kan voorstel.
Stuur jou navraag
Chat
Now

Stuur jou navraag

Kies 'n ander taal
English
Afrikaans
አማርኛ
العربية
Azərbaycan
Беларуская
български
বাংলা
Bosanski
Català
Sugbuanon
Corsu
čeština
Cymraeg
dansk
Deutsch
Ελληνικά
Esperanto
Español
Eesti
Euskara
فارسی
Suomi
français
Frysk
Gaeilgenah
Gàidhlig
Galego
ગુજરાતી
Hausa
Ōlelo Hawaiʻi
हिन्दी
Hmong
Hrvatski
Kreyòl ayisyen
Magyar
հայերեն
bahasa Indonesia
Igbo
Íslenska
italiano
עִברִית
日本語
Basa Jawa
ქართველი
Қазақ Тілі
ខ្មែរ
ಕನ್ನಡ
한국어
Kurdî (Kurmancî)
Кыргызча
Latin
Lëtzebuergesch
ລາວ
lietuvių
latviešu valoda‎
Malagasy
Maori
Македонски
മലയാളം
Монгол
मराठी
Bahasa Melayu
Maltese
ဗမာ
नेपाली
Nederlands
norsk
Chicheŵa
ਪੰਜਾਬੀ
Polski
پښتو
Português
Română
русский
سنڌي
සිංහල
Slovenčina
Slovenščina
Faasamoa
Shona
Af Soomaali
Shqip
Српски
Sesotho
Sundanese
svenska
Kiswahili
தமிழ்
తెలుగు
Точики
ภาษาไทย
Pilipino
Türkçe
Українська
اردو
O'zbek
Tiếng Việt
Xhosa
יידיש
èdè Yorùbá
简体中文
繁體中文
Zulu
Huidige taal:Afrikaans